BioAssay Systems pNPP磷酸酶测定试剂盒- 稳健且适合高通量筛选（HTS）

对硝基苯磷酸酯（pNPP）是大多数磷酸酶的显色底物，包括碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、蛋白酪氨酸磷酸酶和丝氨酸/苏氨酸磷酸酶。反应生成的对硝基苯酚在碱性条件下会变成一种强烈的黄色可溶性产物，可以在分光光度计上方便地在 405 nm 处进行测量。

这种均相“混合即测”检测法只需向磷酸酶中添加一种试剂，并在吸光度读取器上测量产物生成即可。该检测可以在比色皿、试管或多孔板中进行，操作温度可以是室温或 37°C。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品pNPP磷酸酶测定试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点：

- 高灵敏度和宽线性范围：检测限通常为 3 ng 磷酸酶或更低。

- 均相且操作简单：无需洗涤或试剂转移步骤。检测可在 30 分钟内完成。

- 稳健且适合高通量筛选（HTS）：所有试剂均与高通量液体处理仪器兼容。

应用：

- 磷酸酶生产中的酶活性检测和质量控制。

- 磷酸酶反应动力学特性分析。

- 药物发现：高通量筛选磷酸酶抑制剂。

储存条件： 该试剂盒在常温下运输。将试剂储存于 -20°C，其他组分储存于 4°C。保质期：自收到之日起 12 个月。

注意事项： 试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规预防措施。详细信息请参阅材料安全数据表。

使用 96 孔板的操作流程：

1. 将所有试剂平衡至室温：让试剂在室温下静置 30 分钟以平衡至室温。按照每次检测所需量，将 0.5 uL 试剂与 50 uL 检测缓冲液混合，制备 pNPP 底物。

2. 对酶进行系列稀释：在适当的酶缓冲液中对酶进行系列稀释。准备足够的溶液以进行三份检测。将每种酶稀释液各取 50 uL 转移至透明、平底 96 孔板的孔中。此外，准备一个仅含 50 uL 酶缓冲液的空白对照。通过向每个孔中加入 50 uL pNPP 底物来启动反应。

3. 在室温下孵育 10 - 30 分钟。

4. 通过加入 50 uL 终止液来停止反应。通过快速轻拍板子进行混合。或者，可以在轨道式振荡器上将板子振荡 10 秒。

5. 在 405 nm 处读取每个孔的吸光度。

使用 384 孔板的操作流程：

384 孔板的检测流程与 96 孔板相同，只是将 25 uL 样品与 25 uL pNPP 底物混合。孵育完成后，加入 25 uL 终止液。

一般注意事项：

1. 建议每次检测时新鲜配制试剂，尽管配制好的 pNPP 底物在 -20°C 下储存时可稳定长达 4 周。

2. 检测可以在室温或 37°C 下进行。

3. 检测缓冲液的 pH 为 7.2，与大多数中性磷酸酶（如蛋白磷酸酶）兼容。对于酸性磷酸酶，建议使用 100 mM 醋酸钠（pH 5.5）、10 mM MgCl?作为酶缓冲液。对于碱性磷酸酶，建议使用我们的 DALP-250 检测试剂盒。

示例：

- 左图：PTP1B 是庞大的蛋白酪氨酸磷酸酶家族中的一员。在 384 孔板中进行了 pNPP 检测。通过加入 pNPP 底物启动反应后，每 0.5 分钟读取一次，持续 30 分钟。

- 右图：初始速率（Vo）与酶浓度的关系图。PTP1B 的检测限为 3 ng。从线性范围内测得的酶活性为 2.2 umoles/min/ug。每分钟的周转数为 82,280。

文献：

1. Lopez-Vales R et al (2010). Fenretinide promotes functional recovery and tissue protection after spinal cord contusion injury in mice. J Neurosci.30(9):3220-6.

2. Oborna I et al (2010). Increased lipid peroxidation and abnormal fatty acid profiles in seminal and blood plasma of normozoospermic males from infertile couples. Hum Reprod. 25(2):308-16.

3. Olsen AS, et al (2010). Limb regeneration is impaired in an adult zebrafish model of diabetes mellitus. Wound Repair Regen. 18(5):532-42. 

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。