BioAssay Systems 磷酸盐测定试剂盒-稳健且适合 HTS

PiBlue 磷酸盐检测试剂盒是基于专有的碧绿色孔雀石染料配方。PiBlue? 试剂与游离磷酸根形成蓝色复合物。该反应快速生成的颜色可以在分光光度计（600 - 660 nm）或酶标仪上方便地测量。这些非放射性比色试剂盒经过优化，提供了卓越的灵敏度和延长的保质期。该检测方法简单快捷，仅需一个添加步骤即可进行磷酸盐测定。检测可以在试管、比色皿或多孔板中进行。检测可以在 96 孔板中方便地进行，适用于高通量筛选酶抑制剂。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品磷酸盐测定试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点：

- 试剂非常稳定：由于我们创新的配方，试剂不会沉淀。因此，在检测前不需要过滤试剂，这通常是其他商业试剂盒所要求的。

- 高灵敏度和宽检测范围：能够检测到低至 20 皮摩尔的磷酸盐，有效范围在 0.4 uM 至 40 uM 磷酸盐之间。

- 快速且方便：单试剂“混合即测”检测法可在 30 分钟内定量游离磷酸盐。

- 兼容常规实验室和高通量筛选（HTS）格式：检测可以在试管、比色皿或微孔板中进行，使用分光光度计和酶标仪。

- 稳健且适合 HTS：在 96 孔板中观察到的 Z' 因子为 0.7 至 0.9。可以在 HTS 液体处理系统上轻松自动化。

应用：

- 磷酸酶检测：从肽、蛋白质或小分子底物中释放磷酸盐。

- 脂肪酶检测：从磷脂中释放磷酸盐。

- 核苷三磷酸酶检测：从核苷三磷酸（ATP、GTP、TTP、CTP 等）中释放磷酸盐。

- 定量磷脂、蛋白质和 DNA 等中的磷酸盐。

- 药物发现：高通量筛选磷酸酶抑制剂。

储存条件： 该试剂盒在常温下运输。PiBlue 试剂和标准品在 4°C 下储存时稳定期为 12 个月。

注意事项： 试剂仅供研究使用。该试剂含有 0.44 M 硫酸。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规预防措施。详细信息请参阅材料安全数据表。

使用 96 孔板的操作流程：

- 重要提示：在使用前，试剂必须恢复至室温并充分摇匀。PiBlue? 试剂对磷酸盐非常敏感。重要的是，所有酶制剂和检测缓冲液中不应含有游离磷酸盐。实验室洗涤剂可能含有高水平的磷酸盐。确保实验室器具用蒸馏水彻底清洗，避免磷酸盐污染。

1. 磷酸盐标准品的稀释：通过将 40 uL 1 mM 磷酸盐标准品与 960 uL 蒸馏水混合，制备 1000 uL 40 uM 磷酸盐预混溶液。对试管进行编号。按照下表所示稀释预混液以制备浓度标准品。试管中的磷酸盐浓度如下。将 50 uL 稀释后的标准品双份移入透明底部 96 孔板的孔中。将稀释后的标准品储存于 4°C 以备后用。

2. 将 50 uL 待测样品（例如酶反应）双份移入微孔板的孔中。对于酶反应，可以通过添加特定抑制剂来终止反应，或者直接通过添加 PiBlue? 试剂来停止反应。反应缓冲液可以作为样品的空白对照。

3. 向每个孔中加入 100 uL PiBlue? 试剂。轻轻敲击板子使其混合均匀。

4. 在室温下孵育 30 分钟以显色。

5. 在酶标仪上测量 620 nm（600 nm - 660 nm）处的吸光度。

使用比色皿的操作流程：

- 对于比色皿检测，将 800 uL 试剂加入 400 uL 样品和标准品中。按照微孔板检测的描述进行检测。

一般注意事项：

- 孵育时间：显色反应在 30 分钟内完成。在磷酸盐浓度较高（>100 uM）的情况下，或者在蛋白质和金属浓度较高时，可能会出现沉淀。如果出现沉淀，需用蒸馏水稀释样品并重复检测。

- 酶反应缓冲液：由于任何外源性游离磷酸盐都会干扰检测，因此重要的是确保用于检测的蛋白质制备、反应缓冲液和实验室器具中不含游离磷酸盐。可以通过将试剂加入缓冲液并测量颜色生成来方便地进行检查。

数据分析：

- 绘制标准曲线，以磷酸盐皮摩尔数（pmoles）对 OD620nm 进行作图。使用线性回归分析确定待测样品中的游离磷酸盐含量。

示例：

图表 1：96 孔板检测中的磷酸盐标准曲线。将 100 uL PiBlue? 试剂加入 50 uL 磷酸盐标准品中。孵育 30 分钟后，在酶标仪上测量 620 nm 处的吸光度。有效检测范围为 0.4 uM 至 50 uM 磷酸盐。根据空白对照值估计的检测限为 20 皮摩尔。变异系数通常低于 6%。Z' 因子 > 0.7。使用竞品产品进行了相同的检测。

文献：

1. Christensen, T., et al. (2020). In vitro characterization of a novel consensus bacterial 6-phytase and one of its variants. Current Biochemical Engineering 6(3): 156-171.

2. Nitta, K., et al. (2021). Investigation of the effects of actinorhodin biosynthetic gene cluster expression and a rpoB point mutation on the metabolome of Streptomyces coelicolor M1146. Journal of Bioscience and Bioengineering.

3. Nitta, K., et al. (2020). Multi-omics analysis of the effect of cAMP on actinorhodin production in Streptomyces coelicolor. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology 8: 595552.

4. Lejeune, C., et al. (2021). Impact of phosphate availability on membrane lipid content of the model strains, Streptomyces lividans and Streptomyces coelicolor. Frontiers in Microbiology 12: 623919.

5. Hwang, J. D., Ortiz-Maldonado, M., & Paramonov, S. (2016). Delivery of Formulated Industrial Enzymes with Acoustic Technology. Journal of laboratory automation, 21(1), 153-165.

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。