BioAssaySystems 胰蛋白酶抑制剂检测试剂盒-稳健且高通量

胰蛋白酶（EC 3.4.21.4）是一种消化性丝氨酸蛋白酶，能够在许多真核和原核生物中水解膳食蛋白质。胰蛋白酶主要在赖氨酸和精氨酸氨基酸的羧基侧切割肽链，但不会在脯氨酸之前切割。BioAssay Systems的QuantiFluo?胰蛋白酶抑制剂检测试剂盒使用一种荧光素异硫氰酸酯（FITC）标记的合成底物。荧光素标记的荧光信号被高度猝灭。当样本中的胰蛋白酶消化底物时，底物被切割成更小的肽段，从而消除了荧光猝灭。通过在λex/em = 485/530 nm处测量FITC标记片段的荧光或荧光偏振（FP），抑制作用通过荧光强度的降低来确定。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品胰蛋白酶抑制剂检测试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

胰蛋白酶抑制剂检测试剂盒：

主要特点：

- 安全。非放射性检测方法。

- 均质且便捷。均质的“混合-孵育-测量”类型检测，无需洗涤和试剂转移步骤。

- 稳健且高通量。可轻松自动化，每天检测数千个样本。检测稳健，Z'因子大于0.7。

应用范围：

用于评估药物和筛选潜在的胰蛋白酶抑制剂。

试剂盒组成（96孔板检测100次）：

- 检测缓冲液：10 mL

- 底物：100 ?L

储存条件：

试剂盒在室温下运输。收货后将所有组分储存于-20°C。有效期：收货后6个月。

注意事项：

试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规预防措施。详细信息请参阅材料安全数据表。

操作步骤：

在检测前，将所有组分平衡至室温。本检测基于动力学反应。为确保孵育时间一致，向样本中加入工作试剂时应迅速，混合应简短但充分。建议使用多通道移液器。检测可在室温下进行。注意：本试剂盒不包含酶或抑制剂。客户需自行提供所需的酶或抑制剂。

样本准备：

为防止自身消化，纯胰蛋白酶溶液可在酸性条件下（1 mM HCl，pH 3.0）长期保存于-80°C。在检测缓冲液中稀释纯化的胰蛋白酶。胰蛋白酶应置于冰上，并尽快使用。将测试化合物溶解于合适的溶剂中（例如DMSO）。建议首先测试所选酶对溶剂的耐受性。对于猪胰蛋白酶，检测中DMSO的最终浓度应小于2%。

96孔板中的抑制剂筛选：

1. 将30 ?L胰蛋白酶分别转移至黑色平底96孔板的各个孔中。同时，分别准备30 ?L胰蛋白酶（“对照”）和30 ?L检测缓冲液（“空白”）的孔。

2. 向对照和空白孔中加入10 ?L测试化合物溶解的缓冲液。例如，如果测试化合物溶解于含有0.1% DMSO的缓冲液中，则向这些孔中加入10 ?L该溶液。

3. 向其余含有酶的孔中加入10 ?L测试化合物。轻拍平板以混合均匀，并在室温下孵育15分钟，使抑制剂阻断酶的活性。

4. 通过将每个孔的1 ?L底物和99 ?L检测缓冲液混合，为所有孔准备好工作试剂。向所有孔中加入80 ?L工作试剂。轻拍平板以混合均匀。在室温下避光孵育30分钟，使用酶标仪在λex/em = 485/530 nm处读取荧光或荧光偏振（FP）。

所需材料（但未提供）：

- 纯化的胰蛋白酶（例如Sigma Aldrich，产品编号T8003），以及如果需要，胰蛋白酶抑制剂对照品（例如大豆胰蛋白酶抑制剂，Cayman Chemical，产品编号14502；苯甲磺酰氟（PMSF），Sigma Aldrich，产品编号P7626）。

- 移液装置及配件（例如多通道移液器）、黑色平底96孔板（例如Corning Costar）、离心管，以及能够读取λex/em = 485/530 nm处荧光或荧光偏振的酶标仪。

左图：胰蛋白酶与不同浓度的大豆胰蛋白酶抑制剂孵育，生成荧光IC50曲线。

右图：为荧光偏振（FP）测量生成了第二条IC50曲线。

文献参考：

1. Manea, M., Mezo, G., Hudecz, F., & Przybylski, M. (2007). Mass spectrometric identification of the trypsin cleavage pathway in lysylproline containing oligotuftsin peptides. Journal of Peptide Science. 13(4):227–236.

2. López-Otín, C., Bond, J. S. (2008). Proteases: multifunctional enzymes in life and disease. Journal of Biological Chemistry, 283(45): 30433–30437.

3. Shah, D., Mital, K. (2018). The Role of Trypsin: Chymotrypsin in Tissue Repair. Advances in Therapy, 35(1): 31–42.

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。