BioAssaySystems 过氧化物酶测定试剂盒实验步骤&荧光法操作步骤

对于许多过氧化物酶来说，最佳底物是过氧化氢（H?O?），但其他过氧化物酶在有机过氧化物（如脂质过氧化物）存在时活性更高。在细胞中，过氧化物酶能够破坏在有氧呼吸过程中作为副产物形成的有毒羟基自由基。过氧化物酶是一个大家族的酶，存在于动物（例如髓过氧化物酶类酶）、植物、真菌和细菌（细胞色素c过氧化物酶类酶，如辣根过氧化物酶）中。

简单、直接且适合自动化的检测过氧化物酶活性的程序具有广泛的应用。BioAssay Systems的过氧化物酶检测试剂盒使用H?O?和一种电子供体染料，在过氧化物酶反应过程中生成甲臜。吸光度（570 nm）或荧光强度（激发波长/发射波长=530/585 nm）是酶活性的直接测量指标。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品过氧化物酶测定试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点：

- 安全。非放射性实验。

- 灵敏且准确。使用低至10 ?L的样本。线性检测范围：比色法检测为2到50 U/L，荧光法检测为0.1到5 U/L过氧化物酶。

- 便捷且高通量。“混合-孵育-测量”型实验。可以轻松与高通量筛选（HTS）液体处理系统自动化配合使用。

应用：

生物样本（例如血浆、血清、尿液、组织和培养基）中过氧化物酶活性的测定。

试剂盒内容：

- 检测缓冲液：20 mL

- 终止试剂：12 mL

- 甲臜：1.5 mL

- 染料试剂：60 ?L

- 3%稳定化H?O?：100 ?L

储存条件：试剂盒在室温下运输。将检测缓冲液、染料试剂和甲臜储存于-20°C。3%稳定化H?O?应在-20°C到4°C之间储存。终止试剂可在-20°C到室温之间储存。保质期：收到后12个月。

注意事项：试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规注意事项。请参考材料安全数据表以获取详细信息。

实验步骤：

样本准备：样本可以根据已建立的方法进行准备[1-3]。为了确保活性在检测范围内，建议测试多个样本稀释度。

试剂准备：实验前，将所有试剂恢复至室温。将3% H?O?用检测缓冲液稀释至0.6%，并在一小时内使用。

比色法操作步骤：

1. 在透明平底96孔板的两个孔中分别加入100 ?L去离子水和100 ?L甲臜。

   - 在单独的孔中分别加入10 ?L去离子水（样本空白）和10 ?L样本。

   - 通过混合以下试剂为所有样本孔准备足够的工作试剂（WR）：对于每个孔，加入95 ?L检测缓冲液、0.5 ?L染料试剂和0.5 ?L新稀释的0.6% H?O?。向每个样本孔加入90 ?L工作试剂。轻拍平板以混合均匀，并在室温下孵育10分钟。

2. 向所有孔中加入100 ?L终止试剂。轻拍平板以混合均匀，并在570 nm处读取吸光度。

荧光法操作步骤：

对于荧光法实验，线性检测范围为0.1到5 U/L。将甲臜用去离子水稀释1:10。

1. 在黑色平底96孔板的两个孔中分别加入100 ?L去离子水和100 ?L稀释后的甲臜。

- 在单独的孔中分别加入10 ?L去离子水和10 ?L样本。

- 通过混合以下试剂为所有样本孔准备足够的工作试剂（WR）：对于每个孔，加入95 ?L检测缓冲液、0.5 ?L染料试剂和0.5 ?L新稀释的0.6% H?O?。向每个孔加入90 ?L工作试剂。轻拍平板以混合均匀，并在室温下孵育10分钟。

2. 向所有孔中加入100 ?L终止试剂。轻拍平板以混合均匀，并在激发波长/发射波长为530/585 nm处读取荧光强度。

文献参考：

1. Wada, A., et al. (2021). Protective effect of luminal uric acid against indomethacin-induced enteropathy: Role of antioxidant effect and gut microbiota. Digestive Diseases and Sciences.

2. Jeon, G., et al. (2021). Melanin-decolorizing activity of antioxidant enzymes, glutathione peroxidase, thiol peroxidase, and catalase.Molecular Biotechnology 63(2): 150-155.

3. Sharma, S., et al. (2020). Heat-induced endoplasmic reticulum stress in soleus and gastrocnemius muscles and differential response to UPR pathway in rats. Cell Stress & Chaperones.

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。