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BioAssaySystems 尿激酶抑制剂筛选试剂盒-安全,非放射性检测

发布者:艾美捷科技    发布时间:2025-03-18     
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尿激酶型纤溶酶原激活剂(尿激酶,uPA)是一种关键的丝氨酸蛋白酶,参与细胞外基质的降解,能够催化纤溶酶原转化为活性纤溶酶。它作为一种溶栓剂,能够分解血栓,而在过表达时,已被报道会影响某些恶性肿瘤(如乳腺癌、前列腺癌等)的生长。BioAssay Systems的DUKI-100试剂盒提供了一种便捷的荧光法手段,用于筛选潜在的尿激酶抑制剂。在此检测中,荧光底物与尿激酶反应,抑制剂会降低在λex/em = 380/450 nm处的荧光强度。


作为BioAssay Systems在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品尿激酶抑制剂筛选试剂盒产品仅用于科研,不可用于临床诊断。

产品名称货号详情

尿激酶抑制剂筛选试剂盒

BAS-DUKI-100查看


尿激酶抑制剂筛选试剂盒:

主要特点:

- 安全。非放射性检测。

- 快速。检测在30分钟内完成。

- 方便且高通量。均质的“混合-孵育-测量”类型检测,可轻松自动化,每天检测数千个样本。


应用范围:

用于药物评估和筛选尿激酶的潜在抑制剂。


试剂盒组成(96孔板检测100次):

- 检测缓冲液:10 mL

- 10 mM抑制剂:40 ?L

- 底物:600 ?L


储存条件:

试剂盒在室温下运输。收货后将所有组分储存于-20°C。有效期:收货后12个月。


注意事项:

试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规预防措施。详细信息请参阅材料安全数据表。


操作步骤:

本检测基于动力学反应。为确保孵育时间一致,向样本中加入工作试剂(WR)时应迅速,混合应简短但充分。建议使用多通道移液器。检测可在室温下进行。注意:试剂盒中不包含酶。此抑制剂检测需要提供感兴趣的酶。


试剂准备:

在检测前,将所有组分平衡至室温,并在打开前短暂离心试管。每次检测应新鲜配制工作试剂(WR)。


酶准备:

酶应在酶缓冲液中配制,例如50 mM Tris-HCl,pH 7.4,100 mM NaCl,0.08% BSA。以下协议针对Cell Sciences(产品编号CRU000A)的天然人尿激酶型纤溶酶原激活剂进行了优化。如果使用不同的酶,建议通过实验确定每孔使用的最佳酶量。


测试化合物准备:

将测试化合物溶解于合适的溶剂中(例如DMSO)。建议首先测试所选酶对溶剂的耐受性。在以下示例中,人尿激酶(Cell Sciences,产品编号CRU000A)能够耐受高达0.3%的DMSO。如果需要参考IC50曲线,可以按照示例IC50曲线中的浓度准备阿米洛利盐酸盐抑制剂作为测试化合物。


96孔板中的抑制剂筛选:

1. 将5 ?L酶分别转移至黑色平底96孔板的各个孔中。至少预留一个孔作为无抑制剂对照(“对照”)和一个孔作为无酶空白(“空白”):分别向对照和空白孔中加入5 ?L酶和5 ?L检测缓冲液。

2. 向对照和空白孔中加入25 ?L测试化合物溶解的检测缓冲液。例如,如果测试化合物溶解于含有0.1% DMSO的检测缓冲液中,则向这些孔中加入25 ?L该溶液。

3. 向其余含有酶的孔中加入25 ?L测试化合物。轻拍平板以混合均匀,并在室温下孵育10分钟,使抑制剂阻断酶的活性。

4. 通过将每个孔的5 ?L底物和95 ?L检测缓冲液混合,为所有孔准备好工作试剂。向所有孔中加入90 ?L工作试剂。轻拍平板以混合均匀。在室温下孵育30分钟。

5. 在λex/em = 380/450 nm处读取荧光强度。

BAS-DUKI-100.jpg

按照标准协议在96孔板中进行双份检测。酶在含有0.3% DMSO的条件下与阿米洛利共同孵育。


文献参考:

1. Law, B. et al. (2004). Design, Synthesis, and Characterization of Urokinase Plasminogen-Activator-Sensitive Near-Infrared Reporter.Chemistry & Biology. 11, 99–106.

2. Mahmood N, Mihalcioiu C and Rabbani SA (2018) Multifaceted Role of the Urokinase-Type Plasminogen Activator (uPA) and Its Receptor (uPAR): Diagnostic, Prognostic, and Therapeutic Applications. Front.Oncol. 8, 24.

3. Rockway TW, Nienaber V, Giranda VL. (2002). Inhibitors of the protease domain of urokinase-type plasminogen activator. Curr Pharm Des. 8(28), 2541-58.


BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司,专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒,产品种类齐全,主要用于科学研究和生物医药开发,以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验,已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括:1.血液尿液化学;2.酶活性测定;3.能量代谢;4.氧化应激;5.高通量HTS试剂;6.阴阳离子检测。


作为BioAssay Systems在中国区域的代理,艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。


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