BioAssaySystems 尿激酶抑制剂筛选试剂盒-安全，非放射性检测

尿激酶型纤溶酶原激活剂（尿激酶，uPA）是一种关键的丝氨酸蛋白酶，参与细胞外基质的降解，能够催化纤溶酶原转化为活性纤溶酶。它作为一种溶栓剂，能够分解血栓，而在过表达时，已被报道会影响某些恶性肿瘤（如乳腺癌、前列腺癌等）的生长。BioAssay Systems的DUKI-100试剂盒提供了一种便捷的荧光法手段，用于筛选潜在的尿激酶抑制剂。在此检测中，荧光底物与尿激酶反应，抑制剂会降低在λex/em = 380/450 nm处的荧光强度。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品尿激酶抑制剂筛选试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

尿激酶抑制剂筛选试剂盒：

主要特点：

- 安全。非放射性检测。

- 快速。检测在30分钟内完成。

- 方便且高通量。均质的“混合-孵育-测量”类型检测，可轻松自动化，每天检测数千个样本。

应用范围：

用于药物评估和筛选尿激酶的潜在抑制剂。

试剂盒组成（96孔板检测100次）：

- 检测缓冲液：10 mL

- 10 mM抑制剂：40 ?L

- 底物：600 ?L

储存条件：

试剂盒在室温下运输。收货后将所有组分储存于-20°C。有效期：收货后12个月。

注意事项：

试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规预防措施。详细信息请参阅材料安全数据表。

操作步骤：

本检测基于动力学反应。为确保孵育时间一致，向样本中加入工作试剂（WR）时应迅速，混合应简短但充分。建议使用多通道移液器。检测可在室温下进行。注意：试剂盒中不包含酶。此抑制剂检测需要提供感兴趣的酶。

试剂准备：

在检测前，将所有组分平衡至室温，并在打开前短暂离心试管。每次检测应新鲜配制工作试剂（WR）。

酶准备：

酶应在酶缓冲液中配制，例如50 mM Tris-HCl，pH 7.4，100 mM NaCl，0.08% BSA。以下协议针对Cell Sciences（产品编号CRU000A）的天然人尿激酶型纤溶酶原激活剂进行了优化。如果使用不同的酶，建议通过实验确定每孔使用的最佳酶量。

测试化合物准备：

将测试化合物溶解于合适的溶剂中（例如DMSO）。建议首先测试所选酶对溶剂的耐受性。在以下示例中，人尿激酶（Cell Sciences，产品编号CRU000A）能够耐受高达0.3%的DMSO。如果需要参考IC50曲线，可以按照示例IC50曲线中的浓度准备阿米洛利盐酸盐抑制剂作为测试化合物。

96孔板中的抑制剂筛选：

1. 将5 ?L酶分别转移至黑色平底96孔板的各个孔中。至少预留一个孔作为无抑制剂对照（“对照”）和一个孔作为无酶空白（“空白”）：分别向对照和空白孔中加入5 ?L酶和5 ?L检测缓冲液。

2. 向对照和空白孔中加入25 ?L测试化合物溶解的检测缓冲液。例如，如果测试化合物溶解于含有0.1% DMSO的检测缓冲液中，则向这些孔中加入25 ?L该溶液。

3. 向其余含有酶的孔中加入25 ?L测试化合物。轻拍平板以混合均匀，并在室温下孵育10分钟，使抑制剂阻断酶的活性。

4. 通过将每个孔的5 ?L底物和95 ?L检测缓冲液混合，为所有孔准备好工作试剂。向所有孔中加入90 ?L工作试剂。轻拍平板以混合均匀。在室温下孵育30分钟。

5. 在λex/em = 380/450 nm处读取荧光强度。

按照标准协议在96孔板中进行双份检测。酶在含有0.3% DMSO的条件下与阿米洛利共同孵育。

文献参考：

1. Law, B. et al. (2004). Design, Synthesis, and Characterization of Urokinase Plasminogen-Activator-Sensitive Near-Infrared Reporter.Chemistry & Biology. 11, 99–106.

2. Mahmood N, Mihalcioiu C and Rabbani SA (2018) Multifaceted Role of the Urokinase-Type Plasminogen Activator (uPA) and Its Receptor (uPAR): Diagnostic, Prognostic, and Therapeutic Applications. Front.Oncol. 8, 24.

3. Rockway TW, Nienaber V, Giranda VL. (2002). Inhibitors of the protease domain of urokinase-type plasminogen activator. Curr Pharm Des. 8(28), 2541-58.

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。