淀粉酶(Amylase)属于糖苷水解酶家族,通过作用于α-1,4-糖苷键将淀粉分解为葡萄糖分子。α-淀粉酶(EC3.2.1.1)在淀粉链的随机位置进行切割,最终从直链淀粉和支链淀粉中产生麦芽三糖、麦芽糖、葡萄糖和“极限糊精”。在哺乳动物中,α-淀粉酶是一种主要的消化酶。在人类中,酶水平升高与唾液腺创伤、因唾液腺炎引起的腮腺炎、胰腺炎和肾衰竭有关。用于测量淀粉酶活性的简单、直接且适合自动化的程序非常受欢迎。BioAssaySystems的EnzyChrom?α-淀粉酶检测方法包括两个步骤:(1)样本中的α-淀粉酶水解淀粉,产物通过α-葡萄糖苷酶迅速转化为葡萄糖,并通过葡萄糖氧化酶产生过氧化氢;(2)通过比色试剂测定过氧化氢浓度。
作为BioAssay Systems在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品【干冰】EnzyChrom α-EnzyChrom 氨基酶测试套件。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
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【干冰】EnzyChrom α-EnzyChrom 氨基酶测试套件 | BAS-ECAM-100 | 查看 |
应用
-用于血液、唾液、尿液、谷物和其他农业样本中的α-淀粉酶活性测定。
主要特点
-灵敏且准确。96孔板检测的线性检测范围为0.3至50U/Lα-淀粉酶。
-便捷。操作过程包括加入单一工作试剂,孵育15分钟,随后加入检测试剂,再孵育20分钟,并在585nm处读取吸光度。
试剂盒组成
-检测缓冲液(pH7.0):20mL
-底物:120uL
-检测试剂:20mL
-酶A:120uL
-葡萄糖标准品:1mL
-酶B:120uL
储存条件
试剂盒在运输过程中使用冰块冷藏。收到后,所有组分应储存于-20°C。有效期:收到后6个月。
注意事项
-试剂仅供研究使用。在使用试剂时,应遵循实验室试剂的常规安全措施。请参阅材料安全数据表以获取详细信息。
操作步骤
-试剂准备:将所有组分平衡至室温。将解冻后的酶混合液放在冰箱或冰上保存。底物可能会出现沉淀。使用前,轻轻振荡试管以溶解沉淀;轻轻旋转检测试剂瓶。
-样本准备:理想情况下,样本应新鲜检测。如果冷冻保存,α-淀粉酶可稳定保存一个月。抗坏血酸、肝素、EDTA、EGTA、柠檬酸、SDS、Tris(>8mM)和乙醇(>0.4%)会干扰检测,应在样本准备中避免使用。如果样本中含有葡萄糖,请按照“一般注意事项”中描述的方法处理样本。建议对不同稀释度的样本进行预实验。推荐稀释倍数:血清50倍,唾液2000倍(在检测缓冲液中稀释)。
操作步骤
1.准备400uM葡萄糖标准品:将提供的(300mg/dL)标准品10uL与406uL检测缓冲液混合。将10uL检测缓冲液、10uL400uM葡萄糖和10uL每个样本分别加入到透明平底96孔板的不同孔中。
2.准备足够量的工作试剂:将40uL检测缓冲液、0.5uL底物、1uL酶A和1uL酶B混合,为每个孔准备足够的工作试剂。将40uL工作试剂加入到每个孔中。在室温(25°C)下孵育15分钟。
3.加入检测试剂:向每个孔中加入150uL检测试剂。混合并孵育20分钟(室温25°C)。使用酶标仪在585nm(540-610nm)处读取吸光度。
一般注意事项
对于已知含有葡萄糖的样本,使用膜过滤器(例如Millipore的MicroconYM-10)去除葡萄糖:将50uL样本加载到MicroconYM-10(10kDa截留分子量)中,并加入500uL检测缓冲液。以14000rpm离心30分钟,检查样本液面,理想情况下样本液面应低于50uL。加入500uL检测缓冲液并重复离心。使用移液器测量最终样本体积,并计算稀释倍数n=最终样本体积/50uL。
文献参考:
1. Han, M. J. (2020). Novel bacterial surface display system based on the Escherichia coli protein mipa. Journal of Microbiology and Biotechnology. 30(7): 1097-1103.
2. Bae, G.-S. (2020). Protective effect of nypa fruticans wurmb. Water extract on acute pancreatitis. Journal of Physiology & Pathology in Korean Medicine. 34(6): 334-340.
3. Lee, Sang-Bum, et al (2019). Impacts of whey protein on starch digestion in rumen and small intestine of steers. Journal of Animal Science and Technology 61.2: 98-108.
BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司,专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒,产品种类齐全,主要用于科学研究和生物医药开发,以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验,已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括:1.血液尿液化学;2.酶活性测定;3.能量代谢;4.氧化应激;5.高通量HTS试剂;6.阴阳离子检测。
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