乙酰乙酸是肝脏主要通过脂肪酸氧化产生的三种酮体之一,通常在尿液和血液中以低浓度存在。血液中酮体浓度增加可能导致代谢性酸中毒,这与糖尿病、儿童低血糖、生长激素缺乏症、酒精或水杨酸盐中毒以及先天性代谢错误有关。乙酰乙酸是一种不稳定的酮体,会自发脱羧释放二氧化碳和丙酮。
简单、直接且适合自动化的乙酰乙酸(AAT)检测程序是非常理想的。BioAssay Systems的QuantiChrom?乙酰乙酸检测试剂盒基于与亚硝基铁氰化钠的反应,生成在550 nm处有吸收的产品。
作为BioAssay Systems在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品乙酰乙酸测定试剂盒。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
产品名称 | 货号 | 详情 |
乙酰乙酸测定试剂盒 | BAS-DAAT-100 | 查看 |
主要特点:
- 灵敏且准确。96孔板检测中乙酰乙酸的线性检测范围为0.012到1 mM(1.2 - 100 nmol/孔)。
- 便捷。无需样本预处理。操作流程包括加入单一工作试剂,并在室温下以动力学模式读取吸光度。
- 高通量。可以作为高通量96孔板检测,每天处理数千个样本。
试剂盒内容(96孔板100次测试):
- AAT缓冲液:10 mL
- AAT试剂:1 mL
- AAT标准品:干燥
应用:直接检测血清、血浆、尿液和其他生物样本中的乙酰乙酸。
储存条件:试剂盒在室温下运输。将所有试剂储存于-20°C。保质期:收到后6个月,AAT标准品复溶后应在2个月内使用。
注意事项:试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规注意事项。请参考材料安全数据表以获取详细信息。
实验步骤:
- 样本:血清和血浆样本应无溶血,并立即进行检测。如果不能立即检测,样本可以在-80°C下储存长达30天。
- 试剂准备:实验前将所有试剂恢复至室温。用100 ?L去离子水复溶AAT标准品管(最终浓度100 mM)。未使用的AAT标准品在-20°C冷冻保存时稳定两个月。
实验操作:
1. 标准品准备:将2 ?L AAT标准品与198 ?L蒸馏水混合,制备1 mM AAT标准品。
2. 样本准备:将每个样本的10-100 ?L分别转移到单独的孔中,并用去离子水补足至最终体积100 ?L。
3. 反应:通过混合每个孔的95 ?L AAT缓冲液和10 ?L AAT试剂来制备工作试剂。向每个孔加入100 ?L工作试剂。轻轻敲击平板以混合均匀。
4. 孵育:在室温下避光孵育,并在动力学模式下读取30分钟的550 nm吸光度。根据最大吸光度处的吸光度值计算乙酰乙酸浓度。
注意事项:
如果计算出的[AAT] > 1 mM,需用去离子水稀释样本并重复检测。将结果乘以稀释倍数。如果预计乙酰乙酸水平较低或可能存在基质效应,建议加入内标。需要内标的样本需要进行两个单独的反应:1)样本加内标;2)单独样本。对于样本加标准品的孔,向80 ?L样本中加入20 ?L 1 mM AAT标准品。对于单独样本的孔,向80 ?L样本中加入20 ?L去离子水。按照正常检测的步骤(标准品和反应)进行后续操作。
乙酰乙酸(AAT)标准曲线(左)。使用内标检测人血浆、血清和尿液中的乙酰乙酸水平(右)。
文献参考:
1. Matsuura, TR et al (2023) Ketones and the Heart : Metabolic Principles and Therapeutic Implications. Circ. Res. 132(7) :882-898.
2. Saito, T., et al. (2019). Autophagy regulates lipid metabolism through selective turnover of NCoR1. Nature communications 10(1):1567.
3. Martin-Murphy, BV et al (2013). Increased susceptibility of natural killer T-cell-deficient mice to acetaminophen-induced liver injury.Hepatology 57.4: 1575-1584.
BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司,专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒,产品种类齐全,主要用于科学研究和生物医药开发,以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验,已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括:1.血液尿液化学;2.酶活性测定;3.能量代谢;4.氧化应激;5.高通量HTS试剂;6.阴阳离子检测。
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