BioAssaySystems 乙酰乙酸测定试剂盒实验步骤及注意事项

乙酰乙酸是肝脏主要通过脂肪酸氧化产生的三种酮体之一，通常在尿液和血液中以低浓度存在。血液中酮体浓度增加可能导致代谢性酸中毒，这与糖尿病、儿童低血糖、生长激素缺乏症、酒精或水杨酸盐中毒以及先天性代谢错误有关。乙酰乙酸是一种不稳定的酮体，会自发脱羧释放二氧化碳和丙酮。

简单、直接且适合自动化的乙酰乙酸（AAT）检测程序是非常理想的。BioAssay Systems的QuantiChrom?乙酰乙酸检测试剂盒基于与亚硝基铁氰化钠的反应，生成在550 nm处有吸收的产品。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品乙酰乙酸测定试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点：

- 灵敏且准确。96孔板检测中乙酰乙酸的线性检测范围为0.012到1 mM（1.2 - 100 nmol/孔）。

- 便捷。无需样本预处理。操作流程包括加入单一工作试剂，并在室温下以动力学模式读取吸光度。

- 高通量。可以作为高通量96孔板检测，每天处理数千个样本。

试剂盒内容（96孔板100次测试）：

- AAT缓冲液：10 mL

- AAT试剂：1 mL

- AAT标准品：干燥

应用：直接检测血清、血浆、尿液和其他生物样本中的乙酰乙酸。

储存条件：试剂盒在室温下运输。将所有试剂储存于-20°C。保质期：收到后6个月，AAT标准品复溶后应在2个月内使用。

注意事项：试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规注意事项。请参考材料安全数据表以获取详细信息。

实验步骤：

- 样本：血清和血浆样本应无溶血，并立即进行检测。如果不能立即检测，样本可以在-80°C下储存长达30天。

- 试剂准备：实验前将所有试剂恢复至室温。用100 ?L去离子水复溶AAT标准品管（最终浓度100 mM）。未使用的AAT标准品在-20°C冷冻保存时稳定两个月。

实验操作：

1. 标准品准备：将2 ?L AAT标准品与198 ?L蒸馏水混合，制备1 mM AAT标准品。

2. 样本准备：将每个样本的10-100 ?L分别转移到单独的孔中，并用去离子水补足至最终体积100 ?L。

3. 反应：通过混合每个孔的95 ?L AAT缓冲液和10 ?L AAT试剂来制备工作试剂。向每个孔加入100 ?L工作试剂。轻轻敲击平板以混合均匀。

4. 孵育：在室温下避光孵育，并在动力学模式下读取30分钟的550 nm吸光度。根据最大吸光度处的吸光度值计算乙酰乙酸浓度。

注意事项：

如果计算出的[AAT] > 1 mM，需用去离子水稀释样本并重复检测。将结果乘以稀释倍数。如果预计乙酰乙酸水平较低或可能存在基质效应，建议加入内标。需要内标的样本需要进行两个单独的反应：1）样本加内标；2）单独样本。对于样本加标准品的孔，向80 ?L样本中加入20 ?L 1 mM AAT标准品。对于单独样本的孔，向80 ?L样本中加入20 ?L去离子水。按照正常检测的步骤（标准品和反应）进行后续操作。

乙酰乙酸（AAT）标准曲线（左）。使用内标检测人血浆、血清和尿液中的乙酰乙酸水平（右）。

文献参考：

1. Matsuura, TR et al (2023) Ketones and the Heart : Metabolic Principles and Therapeutic Implications. Circ. Res. 132(7) :882-898.

2. Saito, T., et al. (2019). Autophagy regulates lipid metabolism through selective turnover of NCoR1. Nature communications 10(1):1567.

3. Martin-Murphy, BV et al (2013). Increased susceptibility of natural killer T-cell-deficient mice to acetaminophen-induced liver injury.Hepatology 57.4: 1575-1584. 

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。