2,2'-联氮-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS?)是一种绿色的阳离子自由基,被还原时会恢复到无色状态。ABTS实验被广泛用于测量抗氧化能力,即食品和生物系统中的氧化还原分子清除自由基的能力。BioAssay Systems的ABTS抗氧化实验通过测量ABTS自由基被还原和从绿色褪色为透明时发生的吸光度变化来实现。在650 nm处的吸光度降低与抗氧化剂浓度成正比,并与特罗洛克斯(Trolox)抗氧化标准曲线进行比较。
作为BioAssay Systems在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品抗氧化测定试剂盒。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
产品名称 | 货号 | 详情 |
抗氧化测定试剂盒 | BAS-DABA-100 | 查看 |
主要特点:
- 快速便捷。5分钟的试剂孵育时间允许快速样本检测。
- 适应性强。与水相和乙醇提取的样本兼容,稳定的信号允许延长运行时间(长达2小时)。
- 高通量。均相“混合-孵育-测量”型实验。可以轻松自动化,每天检测数千个样本。
应用:
用于定量检测食品、饮料和尿液样本中的抗氧化能力。
试剂盒内容(96孔板100次测试):
- ABTS试剂:20 mL
- 3% H?O?:20 ?L
- 特罗洛克斯标准品:100 ?L
- 过氧化氢酶(HRP):100 ?L
储存条件:试剂盒在室温下运输。收到后将所有组分储存于-20°C。保质期:收到后6个月。
注意事项:试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规注意事项。请参考材料安全数据表以获取详细信息。
实验步骤:
样本准备:避免使用洗涤剂和还原剂(DTT、2-巯基乙醇、谷胱甘肽等)。
- 植物或食品提取物:将样本在水相或乙醇溶液中匀浆。如果提取液为酸性或碱性,应在检测前将样本中和。如果样本含有颗粒或浑浊,离心后使用澄清的上清液进行检测。
- 尿液:根据水分水平,将尿液样本稀释5到20倍。对于未知样本,建议测试几种稀释度以确定最佳样本稀释因子(n)。
试剂准备:将所有组分恢复至室温,并在检测前短暂涡旋混合。
96孔板操作步骤:
1. 标准品准备:将16 ?L特罗洛克斯标准品(50 mM)与984 ?L去离子水或样本制备液(例如乙醇)混合,制备1000 ?L 800 ?M预混液。按照表中描述在1.5-mL离心管中稀释标准品。将20 ?L标准品分别转移到透明平底96孔板的单独孔中。
2. 将每个样本的20 ?L分别转移到单独的孔中。
3. 通过混合2 ?L 3% H?O?和86 ?L去离子水制备20 mM H?O?。注意:20 mM H?O?不稳定,每次检测时需现配。
4. 为所有标准品和样本孔准备足够的工作试剂(WR):对于每个孔,混合190 ?L ABTS试剂、1 ?L 20 mM H?O?和1 ?L HRP。首先混合ABTS试剂和H?O?,然后加入HRP。短暂混合后在室温下孵育5分钟。
5. 向所有样本和标准品孔中加入180 ?L工作试剂。轻轻敲击平板,充分混合。如果观察到一些浑浊,持续敲击平板直至溶解。
6. 在30分钟或更长时间(<2小时)后,在650 nm处读取吸光度。
需要但未提供的材料:
移液装置及配件(例如多通道移液器)、透明平底96孔板(例如VWR货号82050-760)、离心管、平板读数器以及样本提取所需材料。
左图:特罗洛克斯标准曲线;右图:样本使用标准协议进行检测。
文献参考:
1. Garc?a-Alonso, et al. (2004). Evaluation of the antioxid ? ant properties of fruits. Food chemistry, 84(1), 13-18.
2. Gupta, D. (2015). Methods for determination of antioxidant capacity: A review. International Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, 6(2), 546.
3. Niki, E. (2010). Assessment of antioxidant capacity in vitro and in vivo. Free Radical Biology & Medicine, 49(4), 503-515.
BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司,专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒,产品种类齐全,主要用于科学研究和生物医药开发,以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验,已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括:1.血液尿液化学;2.酶活性测定;3.能量代谢;4.氧化应激;5.高通量HTS试剂;6.阴阳离子检测。
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