活性氧对细胞关键成分的氧化攻击与多种人类疾病有关,例如动脉粥样硬化、心血管疾病、糖尿病、肝脏疾病和炎症性风湿病。
硫代巴比妥酸反应性物质(TBARS)是脂质过氧化产物分解过程中形成的小分子终产物(主要是丙二醛,MDA)。在这些疾病中,TBARS水平已被证明是升高的。简单、直接且准确的TBARS检测方法在研究和药物发现中具有广泛的应用。BioAssaySystems的TBARS检测基于TBARS与硫代巴比妥酸(TBA)的反应,生成粉红色产物。在535nm处的吸光强度或在(λex/em=530nm/550nm)处的荧光强度与样本中的TBARS浓度成正比。
作为BioAssay Systems在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品TBARS测定试剂盒。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
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TBARS测定试剂盒 | BAS-DTBA-100 | 查看 |
TBARS测定试剂盒主要特点:
-灵敏且准确。线性检测范围:比色法检测为1-30?M,荧光法检测为0.1-1.5?MMDA。
应用范围:
-直接检测:血清、血浆、尿液、唾液和其他生物样本。
-药物发现/药理学:药物对TBARS的影响。
试剂盒组成:
-TBA试剂:25mL
-标准品:50?L,6MMDA
-10%三氯乙酸(TCA):25mL
储存条件:
试剂盒在室温下运输。将所有组分储存于-20°C。自收货之日起有效期为六个月。
注意事项:
试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规预防措施。详细信息请参阅材料安全数据表。
样本准备:
如果样本不能立即检测,可在-80°C下冷冻保存(稳定一个月)。尿液样本在25°C或更低温度下至少可稳定保存3天。尿液和唾液样本可直接检测(n=1)。以下样本在检测前需要脱蛋白:
1.对于血清和血浆,将每个样本的100?L转移至标记的1.5-mL离心管中。对于组织样本,称取约20mg组织放入200?L冰冷的磷酸盐缓冲液(PBS)中。在冰上进行短暂超声处理(例如20秒)以匀浆组织。如果需要,可取出20?L用于蛋白质分析。将100?L组织裂解液放入标记的1.5mL微量离心管中。对于细胞样本,用200?L冰冷的PBS收集5×10?个细胞,并超声处理以破坏细胞。如果需要,可取出20?L用于蛋白质分析。将100?L细胞裂解液放入标记的1.5mL微量离心管中。
2.向每个100?L样本中加入200?L冰冷的10%TCA。在冰上孵育5分钟。
3.在Eppendorf离心机中以14,000rpm离心5分钟。将每个上清液的200?L转移至新的标记管中。这些预处理样本的稀释因子为n=3。
荧光法检测步骤:
荧光法检测比比色法灵敏20倍。
1.按比色法检测步骤准备标准品。将每个标准品的10?L转移至标记的试管中。加入190?L去离子水(最终浓度分别为0、0.45、0.90、1.50?MMDA)。
样本:在单独的试管中加入200?L处理后的样本。
2.加入200?LTBA试剂。涡旋混合后在100°C下孵育60分钟。将试管冷却至室温,涡旋并短暂离心。
3.将每个试管中的100?L分别以双份形式加入黑色平底96孔板的孔中。在酶标仪上读取荧光强度(λex/em=530nm/550nm)。
所需材料(但未提供):
-移液装置、离心管、离心机、透明平底未涂层96孔板、光学密度或荧光酶标仪、超声仪、水浴或加热块。
文献参考:
1. Paul, S., et al. (2021). D4F prophylaxis enables redox and energy homeostasis while preventing inflammation during hypoxia exposure.Biomedicine & Pharmacotherapy. 133: 111083.
2. Liang, K., et al. (2020). Effect of storage on n-3 PUFA-enriched eggs.CyTA - Journal of Food. 18(1): 102-107.
3. Nawab, A., et al. (2019). Effect of dietary curcumin on the antioxidant status of laying hens under high- temperature condition. Journal of Thermal Biology. 86: 102449.
BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司,专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒,产品种类齐全,主要用于科学研究和生物医药开发,以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验,已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括:1.血液尿液化学;2.酶活性测定;3.能量代谢;4.氧化应激;5.高通量HTS试剂;6.阴阳离子检测。
作为BioAssay Systems在中国区域的代理,艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。
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