BioAssay Systems 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶抑制剂筛选试剂盒，高通量筛选葡萄糖-6-磷酸脱氢酶抑制剂

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PDH）是一种位于磷酸戊糖途径中的细胞质酶，通过维持辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）的水平为细胞提供还原能量。G6PDH将烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP）还原为NADPH，同时氧化葡萄糖-6-磷酸（G6P）。人类如果遗传性缺乏G6PDH，则容易患非免疫性溶血性贫血。最近的研究发现，G6PDH在癌细胞的存活、增殖和转移中起着关键作用。因此，该酶的抑制剂是开发新型抗癌疗法的有吸引力的候选药物。

BioAssay Systems的非放射性比色G6PDH测定基于NADPH耦联的酶促反应中四氮唑盐MTT的还原。MTT还原形式在565纳米处有最大吸收峰。565纳米处吸光度的增加与酶活性成正比。通过比较经测试化合物处理的G6PDH的活性与未经处理的G6PDH的活性，可以确定测试化合物的抑制百分比。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品葡萄糖-6-磷酸脱氢酶抑制剂筛选试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点：

- 安全：非放射性测定。

- 高通量：均质“混合-孵育-测量”型测定，可轻松在高通量筛选液体处理系统上自动化操作。

- 快速可靠：可在30分钟内完成，无需37摄氏度加热器。

应用范围：

- 高通量筛选葡萄糖-6-磷酸脱氢酶抑制剂并评估其效果。

试剂盒组成（96孔板，100次测试）：

- 测定缓冲液：10毫升

- 二氢酶：120微升

- NADP/MTT：1毫升

- 10×底物：100微升（450毫摩尔/升G6P）

储存条件：

- 试剂盒在常温下运输。收到后将所有组分储存于-20摄氏度。有效期：收到后6个月。

注意事项：

- 试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规预防措施。请参阅材料安全数据表以获取详细信息。

操作步骤：

该测定基于动力学反应。为确保孵育时间一致，加入工作试剂的操作应迅速，混合应简短但彻底。建议使用多通道移液器。可在任何所需温度（例如25摄氏度或37摄氏度）下进行测定。

样本准备：

- 以下协议针对L. Mesenteroides的G6PDH进行了优化。使用去离子水将纯化的G6PDH稀释至0.0003 U/微升。如果分析其他物种，建议您通过实验确定Km值，然后调整工作试剂中的底物体积，使100微升反应中的底物最终浓度接近Km值。

- 将测试化合物溶解于所选溶剂中。如果使用DMSO或DMF，建议先测试所选酶对DMSO和DMF的耐受性。对于L. Mesenteroides的G6PDH，加入反应中的5微升测试化合物的DMSO浓度应不超过2体积百分比（v/v%）；而DMF浓度应不超过40体积百分比（v/v%）。

G6PDH反应准备：

1. 将20微升G6PDH分别加入不同的孔中。

2. 保留两个含有G6PDH的孔，一个用于空白（无底物），一个用于对照（无抑制剂）。

3. 向对照和空白孔中加入5微升测试化合物所溶解的溶剂。例如，如果测试化合物溶解于2体积百分比（v/v%）的DMSO中，则向这些孔中加入5微升2体积百分比（v/v%）的DMSO。

4. 向其余含有G6PDH的孔中加入5微升测试化合物。轻拍孔板以混合。

5. 在25摄氏度下孵育孔板15分钟。

6. 通过将10×底物在去离子水中稀释10倍来准备足够的1×底物。（每个反应孔需要8微升1×底物）

7. 通过混合为每个孔（除空白孔外）准备足够的反应混合液（RM）：70微升测定缓冲液、8微升NAD/MTT、1微升二氢酶和8微升1×底物。

 通过混合为每个空白孔准备空白反应混合液（BRM）：70微升测定缓冲液、8微升NAD/MTT、1微升二氢酶和8微升去离子水（无1×底物）。

 向空白孔中加入75微升BRM。向其余孔中加入75微升RM。轻拍孔板以简短但彻底地混合。

8. 在室温下孵育孔板15分钟，并在565纳米处读取吸光度。

所需材料（但未提供）：

- 纯化的G6PDH（例如Calzyme产品编号078A0020），如果需要，还可以使用锌离子抑制剂（例如Zn(NO?)?·6H?O，Sigma产品编号228737）。

- 移液装置及配件（例如多通道移液器）、透明平底96孔板（例如VWR产品编号82050-760）和酶标仪。

Zn（NO3）2滴定：将来自肠系膜乳杆菌的G6PDH与dH20中不同浓度的Zn（NO3）2。

文献参考：

1. Zhang, Zhaoyun, et al. (2010) High glucose inhibits glucose-6-phosphate dehydrogenase, leading to increased oxidative stress and β-cell apoptosis. The FASEB Journal 24.5: 1497-1505.

2. Tian, Wang-Ni, et al. (1998) Importance of glucose-6-phosphate dehydrogenase activity for cell growth. Journal of Biological Chemistry 273.17:10609-10617.

3. Atamanalp, M., et al. (2016) Investigation of in vitro effects of some metal ions on glucose 6-phosphate dehydrogenase which purified from freshwater fish Capoeta umbla Kidney. HydroMediT 2016: 39

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。