BioAssay Systems α-淀粉酶抑制剂筛选试剂盒操作步骤

淀粉酶属于糖苷水解酶家族，通过作用于α-1,4-糖苷键将淀粉分解为葡萄糖分子。α-淀粉酶（EC 3.2.1.1）在淀粉链上随机位置进行切割，最终生成麦芽三糖、麦芽糖、葡萄糖和“极限糊精”，分别来自直链淀粉和支链淀粉。在哺乳动物中，α-淀粉酶是一种主要的消化酶。人体中酶水平升高与唾液腺创伤、因唾液腺炎症引起的腮腺炎、胰腺炎和肾功能衰竭有关。

在研究和药物发现中，用于测量α-淀粉酶抑制的简单、直接且适合自动化的程序非常受欢迎。BioAssay Systems的α-淀粉酶抑制剂筛选试剂盒利用荧光偏振（FP），这是一种非常可靠且稳健的技术，显著减少了背景基质的干扰，能够有效识别潜在的α-淀粉酶抑制剂。在该测定中，α-淀粉酶切割一种荧光淀粉底物。荧光偏振的减少与样本中的α-淀粉酶活性成正比。因此，通过荧光偏振的增加来确定抑制效果（激发/发射波长 = 485/520纳米）。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品α-淀粉酶抑制剂筛选试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点：

- 安全：非放射性测定。

- 快速便捷：均质“混合-孵育-测量”型测定。可在室温下不到一小时内完成。

- 稳健且高通量：荧光偏振测定显著减少了背景基质的干扰。在384孔板格式中观察到的Z'因子大于0.90。可以轻松自动化，每天检测数千个样本。

应用范围：

- 用于评估药物和筛选潜在的α-淀粉酶抑制剂。

试剂盒组成（384孔板，400次测试）：

- 测定缓冲液：10毫升

- 淀粉酶：30微升

- 底物：12毫升

- 抑制剂对照：80微升（3毫摩尔/升阿卡波糖）

- 散装试剂和筛选服务：可根据需求提供。

储存条件：

- 试剂盒在室温下运输。收到后将所有组分储存于-20摄氏度。有效期：收到后6个月。

注意事项：

- 试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规预防措施。请参阅材料安全数据表以获取详细信息。

操作步骤：

在黑色平底板中进行测定，使用能够测量485/520纳米荧光偏振的读取器。以下384孔板操作步骤为示例。试剂体积可根据需要调整，例如96孔板测定：30微升酶、10微升抑制剂和60微升底物。在测定前，将所有组分平衡至室温。将酶置于冰上。短暂离心淀粉酶和抑制剂对照。该测定基于动力学反应。为确保孵育时间一致，加入试剂的操作应迅速，混合应简短但彻底。建议使用多通道移液器。

测试化合物：将测试化合物溶解于水中，或所选溶剂（例如DMSO）中。建议先测试所选酶对溶剂的耐受性。

384孔板抑制剂筛选：

1. 预孵育：将提供的酶（纯化的唾液α-淀粉酶）在测定缓冲液（或20毫摩尔/升磷酸钾、50毫摩尔/升氯化钠，pH 7.0）中稀释10,000倍，并在30分钟内使用。

 将15微升稀释后的酶加入384孔板的“测试”孔中。每次测定运行时，包括两个额外的孔，一个“对照”孔加入15微升酶，一个“空白”孔加入15微升测定缓冲液。

 向“对照”和“空白”孔中加入5微升水或测试化合物所溶解的溶剂。例如，如果测试化合物溶解于0.1% DMSO中，则向这些孔中加入5微升该溶液。

 向“测试”孔中加入5微升测试化合物。轻拍孔板以混合，并在室温下孵育10分钟，使抑制剂阻断酶活性。

2. 酶活性测定：向所有孔中加入30微升底物。轻拍孔板以混合。在室温下避光孵育30分钟，读取485/520纳米处的荧光偏振值。

阿卡波糖对纯猪和人唾液α-淀粉酶的抑制作用：在猪酶和人酶中分别观察到192微摩尔和93微摩尔的半数抑制浓度（IC50）。在384孔板中进行双份测定，抑制剂对照从3毫摩尔/升初始浓度开始，以3倍递减浓度稀释。

文献参考：

1. Gong, L. et al. (2020). Inhibitors of α-amylase and α-glucosidase:Potential linkage for whole cereal foods on prevention of hyperglycemia. Food science & Nutrition. 8(12), 6320-6337.

2. Petrakova, L. et al. (2015). Psychosocial Stress Increases Salivary Alpha-Amylase Activity Independently from Plasma Noradrenaline Levels. PLoS ONE 10(8).

3. Sales, PM. et al. (2012). α-Amylase inhibitors: a review of raw material and isolated compounds from plant source. J Pharm Pharm Sci. 15(1):141-83. 

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。