BioAssay Systems 乙酰胆碱酯酶抑制剂试剂盒：助力阿尔茨海默病研究

乙酰胆碱酯酶（EC 3.1.1.7，AChE），也称为红细胞胆碱酯酶，主要存在于血液和神经突触中。AChE催化神经递质乙酰胆碱水解为胆碱和乙酸，这一反应对于胆碱能神经元在激活后恢复到静息状态是必需的。抑制该酶会导致乙酰胆碱积累，过度刺激烟碱型和毒蕈碱型受体，并破坏神经传导。AChE抑制是管理阿尔茨海默病的重要靶点，AChE抑制剂是用于其管理的最常见药物。除了阿尔茨海默病，AChE抑制剂还在青光眼、重症肌无力、膀胱膨胀等疾病的诊断或治疗中发挥了作用。

BioAssay Systems的QuantiChrom?乙酰胆碱酯酶抑制剂筛选试剂盒基于改进的Ellman方法。在该方法中，乙酰胆碱酯酶作用产生的硫醇胆碱与5,5'-二硫代双（2-硝基苯甲酸）形成黄色产物。在412纳米处测量的产物颜色强度与样本中的酶活性成正比。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品乙酰胆碱酯酶抑制剂试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点：

- 快速可靠：可在30分钟内完成。  

- 高通量：均质“混合-孵育-测量”型测定。  

- 易于自动化：可轻松在高通量筛选液体处理系统上自动化操作，每天可处理数千个样本。

应用范围：

- 高通量筛选乙酰胆碱酯酶抑制剂的抑制效果评估。

试剂盒组成（96孔板，100次测试）：

- 测定缓冲液（pH 7.5）：30毫升  

- DTNB：60微升  

- 底物（100 mM）：500微升  

- 散装试剂：可根据需求定制尺寸。

储存条件：

- 试剂盒在室温下运输。收到后将底物和DTNB储存于-20摄氏度，其他组分储存于室温。有效期：收到后12个月。

注意事项：

- 试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规预防措施。请参阅材料安全数据表以获取详细信息。

操作步骤：

该测定基于酶催化的动力学反应。为确保孵育时间一致，加入工作试剂的操作应迅速，混合应简短但彻底。建议使用多通道移液器。注意：试剂盒中未包含AChE或对照抑制剂。

样本准备：

- 使用测定缓冲液将纯化的AChE稀释至400 U/L。  

- 将测试化合物溶解于所选溶剂中。如果使用DMSO，建议先测试酶对DMSO的耐受性。对于来自电鳗（E. electricus）的AChE，加入反应中的5微升测试化合物的DMSO浓度应不超过40体积百分比（v%）。

试剂准备：

- 将所有组分平衡至所需的反应温度。工作试剂应现配现用，并在30分钟内使用完毕。

以下协议针对来自电鳗（E. electricus）的AChE进行了优化。如果分析其他物种，建议您通过实验确定Km值，然后调整工作试剂中的底物体积，使200微升反应中的底物最终浓度接近Km值。

96孔板反应准备：

1. 将45微升AChE分别加入不同的孔中。将45微升测定缓冲液加入一个孔中，该孔作为无酶对照孔，可用于作为100%抑制的对照。  

2. 向无酶对照孔和一个含有AChE的孔（无抑制剂对照）中加入5微升测试化合物所溶解的溶剂。例如，如果测试化合物溶解于40体积百分比（v%）的DMSO中，则向这些孔中加入5微升40 v%的DMSO。  

3. 向其余含有AChE的孔中加入5微升测试化合物。孵育孔板15分钟。  

4. 对于每个反应孔，将154微升测定缓冲液与1微升底物和0.5微升DTNB混合。向每个样本、样本空白和无抑制剂对照孔中加入150微升这种工作试剂。轻拍孔板以混合。（注意：如果分析的物种不是电鳗，可以调整底物的体积。）  

5. 在酶标仪上分别在0分钟和10分钟时读取412纳米处的吸光度（OD412nm）。

来自电鳗的AChE与不同浓度的多奈哌齐和石杉碱甲共同孵育。每种抑制剂浓度中均含有20体积百分比（v%）的DMSO（在200微升反应中最终浓度为0.5体积百分比）。

文献参考：

1. Bakr, RO et al. (2021). New adenosine derivatives from aizoon canariense l.: In vitro anticholinesterase, antimicrobial, and cytotoxic evaluation of its extracts. Molecules, 26(5).

2. Ji, J et al. (2020). A polyphenol rich sugarcane extract as a modulator for inflammation and neurological disorders. PharmaNutrition, 100187.

3. El-Malah, A. et al (2019). New cyclooctathienopyridine derivatives in the aim of discovering better Anti-Alzheimer's agents. Journal of Molecular Structure. 

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。