BioAssay Systems 焦磷酸酶抑制剂试剂盒- 室温检测：无需 37°C 孵育箱

无机焦磷酸酶（E.C.3.6.1.1）催化无机焦磷酸盐 [P?O???] 的磷酸酯键水解，从而释放出两个正磷酸分子。I 型焦磷酸酶是在所有生物界中发现的关键酶，负责维持正确的焦磷酸平衡，这对于核酸和蛋白质合成以及促进脂肪酸β-氧化是必要的。BioAssay Systems 的 QuantiChrom? 焦磷酸酶抑制剂检测试剂盒基于我们的焦磷酸酶检测试剂盒（DPPT-100），可用于筛选潜在的焦磷酸酶抑制剂。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品焦磷酸酶抑制剂试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点：

- 安全：非放射性检测。

- 快速便捷：操作过程包括酶和抑制剂的孵育、加入单一工作试剂并孵育 30 分钟。

- 室温检测：无需 37°C 孵育箱。

- 高通量：均相“混合-孵育-测量”型检测。可在高通量筛选液体处理系统上轻松自动化。稳健的检测方法，Z’因子为 0.59。可用于 96 孔、384 孔，甚至更高密度的筛选检测。

应用：

- 用于高通量抑制剂筛选和焦磷酸酶调节剂的评估。

试剂盒内容（96 孔板 100 次检测）：

- 检测缓冲液：8 mL

- POMG 试剂 A：2.5 mL

- 焦磷酸盐：100 uL

- POMG 试剂 B：120 uL

- 抑制剂：100 uL

储存条件：试剂盒在室温下运输。收到后将焦磷酸盐储存于 -20°C，其他所有组分储存于 4°C。保质期：收到后 6 个月。

注意事项：试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规注意事项。请参阅材料安全数据表以获取详细信息。

操作步骤：

- 测试化合物准备：将测试化合物溶解于选定的溶剂中（例如 H?O、DMSO）。如果溶剂不是 H?O，建议先测试所选酶对溶剂的耐受性。在我们的测试中，酵母焦磷酸酶（Sigma Aldrich 编号 I1643）可耐受高达 10% 的 DMSO。

- 酶准备：酶应在酶缓冲液中制备，例如 25 mM HEPES（pH 7.2）、5 mM MgCl?。以下协议针对酵母焦磷酸酶（Sigma Aldrich 编号 I1643）进行了优化。酶应在检测前稀释。如果使用不同的酶，建议在 dH?O 中进行酶的系列稀释，以确定每孔使用的最佳酶浓度。

- 注意：

1. 酶缓冲液（例如来自洗涤剂）和测试化合物中的磷酸盐应进行测试和/或避免，因为该检测对游离磷酸盐极为敏感。如果单独酶与显色试剂的 OD???nm 大于 0.2，建议使用 10 kDa NMWL 膜滤器（例如 Amicon? Ultra 0.5 mL Ultracel 或类似产品）至少冲洗 3 次以去除游离磷酸盐。

2. 避免使用 EDTA 和可能影响酶活性的金属（如 Zn、Co、Mn 和 Ca）。

3. 高浓度蛋白质可能会通过沉淀干扰显色反应。

96 孔板中的抑制剂筛选：

1. 将 10 uL 酶分别转移至透明平底 96 孔板的不同孔中。至少预留一个孔作为无抑制剂对照（“对照”）和一个孔作为无酶空白（“空白”）：分别向对照孔和空白孔中加入 10 uL 酶样本和 10 uL 检测缓冲液。

- 向对照孔和空白孔中加入 10 uL 溶解测试化合物的溶剂溶液。例如，如果测试化合物溶解于 0.5% DMSO 中，则向这些孔中加入该溶液 10 uL。

2. 向其余含有酶的孔中加入 10 uL 测试化合物。轻拍平板以混合（确保酶和抑制剂混合均匀），在室温下孵育 10 分钟，使抑制剂阻断酶活性。

3. 通过将每孔的 1 uL 焦磷酸盐与 80 uL 检测缓冲液混合，为所有孔准备足够量的工作试剂（WR）。将 70 uL WR 转移至所有孔中。轻拍平板以混合。在室温下孵育 30 分钟。

4. 通过将 100 份 POMG 试剂 A 与 1 份 POMG 试剂 B 混合，为所有孔准备足够量的显色试剂。向所有孔中加入 20 uL 显色试剂。彻底轻拍平板以混合。在室温下孵育 30 分钟，并读取 620 nm 处的吸光度。

实例：

酵母焦磷酸酶（Sigma Aldrich 编号 I1643，浓度为 10 U/L）与不同浓度的 NaF 和 EDTA 在室温下孵育 10 分钟。酶反应和检测按照标准程序在 96 孔板中进行。注意：检测缓冲液中含有 EDTA。

文献：

1. Yang, L., Liao, R. Z., Yu, J. G., & Liu, R. Z. (2009). DFT study on the mechanism of Escherichia coli inorganic pyrophosphatase. The Journal of Physical Chemistry B, 113(18), 6505-6510.

2. Carman, G. M., & Han, G. S. (2006). Roles of phosphatidate phosphatase enzymes in lipid metabolism. Trends in biochemical sciences, 31(12), 694-699.

3. Nakano, T., et al (1999) Purification and Characterization of Phytase from Bran of Triticum aestivum L. cv. Nourin #61. Food Sci. Technol.Res. 5(1): 18.

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。