BioAssay Systems 焦磷酸酶测定试剂盒-高通量：均相“混合-孵育-测量”型检测

无机焦磷酸酶（E.C.3.6.1.1）催化无机焦磷酸盐 [P?O???] 的磷酸酯键水解，从而释放出两个正磷酸分子。I 型焦磷酸酶是存在于所有生物界中的关键酶，负责维持正确的焦磷酸平衡，这对于核酸和蛋白质合成以及促进脂肪酸β-氧化是必要的。能够简单、直接且适合自动化的焦磷酸酶活性检测程序是非常理想的。BioAssay Systems 的 DPPT-100 检测试剂盒基于我们专有的磷酸盐检测试剂盒（POMG-25H）。在 620 nm 处测量的吸光度与焦磷酸水解所释放的磷酸量成正比。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品焦磷酸酶测定试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点：

- 安全且灵敏：非放射性检测。可使用低至 10 ?L 的样本。96 孔板的线性检测范围为 1.0 至 20 U/L 活性。

- 快速便捷：操作过程仅涉及加入单一工作试剂并孵育 60 分钟。室温检测，无需 37°C 孵育箱。

- 高通量：均相“混合-孵育-测量”型检测。可轻松自动化，每天检测数千个样本。

应用：

- 用于检测和定量焦磷酸酶活性。

试剂盒内容（96 孔板 100 次检测）：

- 检测缓冲液（pH 7.2）：8 mL

- POMG 试剂 A：2.5 mL

- 焦磷酸盐：100 ?L

- POMG 试剂 B：120 ?L

- 标准品：120 ?L（1 mM 磷酸）

储存条件：试剂盒在室温下运输。收到后将所有组分储存于 4°C。保质期：收到后 6 个月。

注意事项：试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规注意事项。请参阅材料安全数据表以获取详细信息。

操作步骤：

- 样本准备：在制备焦磷酸酶样本时，必须避免使用含有磷酸盐的洗涤剂和缓冲液，因为该检测对游离磷酸盐极为敏感。如果单独酶与显色试剂的 OD???nm 大于 0.2，建议使用 10 kDa NMWL 膜滤器（例如 Amicon? Ultra 0.5 mL Ultracel 或类似产品）至少冲洗 3 次以去除游离磷酸盐。避免使用含有 EDTA 和金属（如 Zn、Co、Mn 和 Ca）的样本。高浓度蛋白质可能会通过沉淀干扰显色反应。对于活性未知的酶样本，建议在 dH?O 中进行系列稀释，以使活性处于检测范围内，并选择无沉淀发生的稀释倍数。

- 1. 酶反应：

- 将 10 ?L 焦磷酸酶样本分别转移至透明平底 96 孔板的不同孔中。为每个样本预留一个孔作为空白（10 ?L 缓冲液，不含酶）。

- 通过将每孔的 1 ?L 焦磷酸盐与 80 ?L 检测缓冲液混合，为所有检测孔制备足够量的工作试剂（WR）。

- 通过向每个孔中加入 70 ?L WR 启动反应。轻轻敲击平板以混合反应液。

- 在室温或所需温度下孵育平板 30 分钟。

- 2. 磷酸盐测定：

- 通过将 20 ?L 1 mM 磷酸标准品加入 480 ?L dH?O 中，制备 40 ?M 磷酸预混液。按表格所示编号并稀释标准品。

- 将每个标准品的 80 ?L 双份转移至检测板的不同孔中。

- 准备显色试剂。每个孔需要 20 ?L 显色试剂，通过将 100 体积的 POMG 试剂 A 与 1 体积的 POMG 试剂 B 混合制备（例如 1 mL 试剂 A 和 10 ?L 试剂 B）。制备好的试剂在室温下至少稳定 1 天。

- 在第 1 步的 30 分钟时，向每个孔中加入 20 ?L 显色试剂。轻轻敲击平板混合，并在室温下额外孵育 30 分钟以显色。

- 3. 在酶标仪上测量 600 nm - 660 nm（峰值 620 nm）处的吸光度。

- 注意：如果观察到的磷酸盐浓度等于或高于 40 ?M 磷酸标准品，请将酶提取液稀释于缓冲液中，并重复检测。

所需材料（但未提供）：

- 移液装置（多通道）。透明底 96 孔板（例如 Corning Costar）和酶标仪。10 kDa NMWL 膜滤器。

实例：

- 左侧：磷酸盐标准曲线。

- 右侧：使用标准 96 孔检测程序对焦磷酸酶进行滴定。所用酶为酿酒酵母焦磷酸酶（Sigma 编号 I1643-100 UN）。

文献：

1. Yang, L., Liao, R. Z., Yu, J. G., & Liu, R. Z. (2009). DFT study on the mechanism of Escherichia coli inorganic pyrophosphatase. The Journal of Physical Chemistry B, 113(18), 6505-6510.

2. Carman, G. M., & Han, G. S. (2006). Roles of phosphatidate phosphatase enzymes in lipid metabolism. Trends in biochemical sciences, 31(12), 694-699.

3. Nakano, T., et al (1999) Purification and Characterization of Phytase from Bran of Triticum aestivum L. cv. Nourin #61. Food Sci. Technol.Res. 5(1): 18.

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。