β-N-乙酰葡糖胺苷酶(NAG)是一种溶酶体酶,参与多种生物过程,如糖蛋白和糖脂的降解、细胞增殖和信号传导。NAG存在于体内的许多组织中,但由于其分子量较大,无法通过肾小球滤膜。因此,在肾小管损伤或肾小球病变的情况下,尿液中的NAG活性会增加。尿液中NAG水平的升高是肾脏损伤的早期迹象,例如由糖尿病、炎症、肾病综合征、泌尿道感染等引起的损伤。多种癌症与血清中NAG水平升高有关。遗传性脂质贮积症,如泰-萨克斯病和桑德霍夫病,是由于该酶的缺乏引起的。
BioAssay Systems的非放射性、比色法NAG测定试剂盒基于从合成底物中水解对硝基苯酚。加入终止试剂后,对硝基苯酚会呈现强烈的颜色。加入终止试剂后在405nm处吸光度的增加与酶活性成正比。
作为BioAssay Systems在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品Β-n-乙酰氨基葡萄糖苷酶试剂盒。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
产品名称 | 货号 | 详情 |
Β-n-乙酰氨基葡萄糖苷酶试剂盒 | BAS-DNAG-100 | 查看 |
主要特点:
- 快速且灵敏。线性检测范围(20 L样本):在37?C下反应30分钟时,0.2至50 U/L。
- 高通量。均质“混合-孵育-测量”型测定。可在高通量筛选液体处理系统上自动化处理,每天可处理数千个样本。
应用领域:
- 测定生物样本(例如尿液、血清、血浆、细胞裂解液等)中的β-N-乙酰葡糖胺苷酶活性。
试剂盒组成(96孔板100次测试):
- 底物:10 mL
- 终止试剂:12 mL
- 标准品:1 mL(12.5 mM硝基苯酚)
储存条件:试剂盒在室温下运输。收到后将底物储存于-20°C,其他组分储存于4°C。保质期:收货后12个月。
注意事项:试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规注意事项。请参阅材料安全数据表以获取详细信息。
操作步骤:
本测定基于动力学反应。为确保孵育时间一致,加入底物和终止试剂到样本中的操作应迅速,混合应简短但彻底。建议使用多通道移液器。
样本准备:
- 血清和血浆可以直接测定。对于含有沉淀的尿液样本,应在4°C下以10,000 x g离心3分钟,测定上清液。
- 细胞裂解液:通过在4°C下以2,000 x g离心5分钟收集细胞。对于贴壁细胞,不要使用蛋白酶来收获细胞,而是使用橡胶刮刀。在冷PBS中适当体积中匀浆或超声处理细胞,大约每毫升100万细胞。在4°C下以14,000 x g离心10分钟。取上清液用于测定。
试剂准备:将所有组分平衡至37°C。短暂涡旋或上下移液所有组分以确保新鲜复溶。
标准品准备:将15 L 12.5 mM硝基苯酚标准品与235 L去离子水混合,制备750 M预混液。
反应准备:
1. 将每个样本的20 L分别加入到两个单独的孔中(ODSAMPLE和ODSAMPLE BLANK)。将每个标准品的20 L分别加入到96孔透明平底板的单独孔中(ODSTD)。
2. 向样本空白孔中加入100 L终止试剂。
3. 向所有标准品、样本和样本空白孔中加入80 L底物溶液。轻轻敲击板以混匀。
4. 在37°C或所需温度下孵育30分钟。向每个标准品和样本孔中加入100 L终止试剂。注意:不要向样本空白孔中加入任何东西。轻轻敲击板以混匀。
5. 在405nm处读取吸光度。
所需材料(未提供):
- 移液装置及配件(例如多通道移液器)、96孔透明平底板(例如VWR货号82050-760)、离心管和酶标仪。
文献:
1. Sheira, G., et al. (2015). Urinary biomarker N-acetyl- β-Dglucosaminidase can predict severity of renal damage in diabetic nephropahy. Journal of Diabetes &Metabolic Disorders. 12; 14:4.
2. Severini, G., et al. (1995). A study of serum glycosidases in cancer. J Cancer Res Clin Oncol. 121(1):61-3.
3. Hartmann, D., et al. (2015). Plasma N-acetyl-glucosaminidase in advanced gastro-intestinal adenocarcinoma correlates with age, stage and outcome. Future Oncology. 11(2):193-203.
BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司,专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒,产品种类齐全,主要用于科学研究和生物医药开发,以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验,已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括:1.血液尿液化学;2.酶活性测定;3.能量代谢;4.氧化应激;5.高通量HTS试剂;6.阴阳离子检测。
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