BioAssay Systems 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶试剂盒-用于测定生物样本中的G6PDH活性

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PDH）是一种位于细胞质中的酶，属于磷酸戊糖途径，通过维持辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）的水平为细胞提供还原能量。G6PDH在氧化葡萄糖-6-磷酸（G6P）的同时，将烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP）还原为NADPH。人类如果遗传性缺乏G6PDH，容易患非免疫性溶血性贫血。BioAssay Systems的非放射性比色法G6PDH检测基于NADPH偶联的酶促反应，将四氮唑盐MTT还原为在565 nm处具有最大吸收峰的还原型MTT。565 nm处吸光度的增加与酶活性成正比。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品葡萄糖-6-磷酸脱氢酶试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点

- 快速灵敏。线性检测范围（20 L样本）：15分钟反应为0.2至100 U/L。

- 方便高效。均质“混合-孵育-测量”型检测。可在高通量筛选液体处理系统上自动化操作，每天可处理数千个样本。

应用

用于测定生物样本（如血浆、血清、红细胞、组织和培养基）中的G6PDH活性。

试剂盒组成（96孔板，100次检测）

- 检测缓冲液：10 mL

- 二氢硫色素：120 L

- NADP/MTT溶液：1 mL

- 校准液：1.5 mL

- 底物：1 mL

储存条件

试剂盒在常温下运输。收到后将所有组分储存于-20°C。有效期：收到后6个月。

注意事项

- 试剂仅供研究使用。使用试剂时需遵循实验室试剂的常规注意事项。详细信息请参阅材料安全数据表。

操作步骤

本检测基于动力学反应。为确保孵育时间一致，加入工作试剂时需迅速，混合需短暂但充分。建议使用多通道移液器。检测可在任何所需温度下进行（例如25°C或37°C）。

样本准备

- 血清和血浆可直接检测。

- 组织：解剖前，用磷酸盐缓冲液（pH 7.4）冲洗组织以去除血液。将50 mg组织在含有50 mM磷酸钾（pH 7.5）的缓冲液中匀浆。在4°C下以10,000 × g离心15分钟。取上清液用于检测。

- 细胞裂解液：通过在4°C下以2,000 × g离心5分钟收集细胞。对于贴壁细胞，不要使用蛋白酶酶收获细胞，而是使用橡胶刮刀。在含有50 mM磷酸钾（pH 7.5）的冷缓冲液中适当体积中匀浆或超声处理细胞。在4°C下以10,000 × g离心15分钟。取上清液用于检测。

- 所有样本可在-20°C至-80°C下保存至少一个月。

试剂准备

将试剂平衡至所需反应温度（例如25°C或37°C）。使用前短暂离心试管。按每孔计算，将8 L底物、8 L NADP/MTT溶液、1 L二氢硫色素和70 L检测缓冲液混合，制备足够所有检测孔的工作试剂（WR）。

反应准备

1. 将100 L H?O（ODH?O）和100 L校准液（ODCAL）溶液分别加入透明平底96孔板的孔中。

2. 将每个样本的20 L分别加入不同的孔中，然后向每个样本孔中加入80 L WR。轻轻敲击孔板以混合。

3. 在酶标仪上读取565 nm处的吸光度（OD?），15分钟后再次读取（OD??）。

所需材料（但未提供）

移液装置及配件（如多通道移液器）、透明平底96孔板（如VWR货号82050-760）、离心管和酶标仪。

实验示例

文献：

1. Glock, GE and McLean, P (1953) Further Studies on the Properties and Assay of Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase and 6-Phosphogluconate Dehydrogenase of Rat Liver. Biochem. 55:400-8.

2. Kirman, HN and Hendrickson, EM (1962) Glucose 6-Phosphate Dehydrogenase from Human Erythrocytes II. Subactive states of the enzyme from normal persons. J. Biol. Chem. 237: 2371-6.

3. Tian, W-N et. al. (1998) Importance of Glucose-6-phosphate Dehydrogenase Activity for Cell Growth. J. Biol. Chem. 273: 10609-17.

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。