BioAssay Systems 乙二醛酶i测定试剂盒-灵敏且便捷的GLO-1活性测定方法

乙二醛酶I（GLO-1），也称为乳酸谷胱甘肽裂解酶，别名甲基乙二醛酶、醛酮变位酶、酮醛变位酶以及（R）-S-乳酸谷胱甘肽甲基乙二醛裂解酶，是一种催化半硫缩醛加合物异构化的酶。这些半硫缩醛加合物是谷胱甘肽基团与醛类在自发反应中形成的。乙二醛酶I的主要生理功能是解毒甲基乙二醛，这是一种活性2-氧代醛，在低浓度下具有细胞抑制作用，而在毫摩尔浓度下具有细胞毒性。乙二醛酶I是针对细菌、原生动物和人类癌症开发药物的靶点。

在研究和药物发现中，能够简单、直接且适合自动化的检测生物样本中GLO-1活性的方法是非常理想的。BioAssay Systems的乙二醛酶I试剂盒提供了一种灵敏且便捷的GLO-1活性测定方法。该方法通过监测GLO-1反应产物S-乳酸谷胱甘肽在240 nm处吸光度的变化来实现。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品乙二醛酶i测定试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点

- 灵敏准确。检测下限为4 U/L的GLO-1活性。

- 简单高效。该程序涉及在微孔板中将提供的底物与样本孵育。可以轻松自动化，每天可检测数千个样本。

应用

- 直接检测：酶制剂或生物样本中的GLO-1活性。

- 药物发现/药理学：药物对GLO-1活性的影响。

试剂盒组成

- 检测缓冲液（pH 6.6）：20 mL

- 底物：1 mL

- 96孔紫外滴定板：1块

- 辅助底物：1 mL

储存条件

试剂盒在室温下运输。将板在室温下保存，其他组分在-20°C下保存。有效期：收到后12个月。

注意事项

- 试剂仅供研究使用。使用试剂时需遵循实验室试剂的常规注意事项。详细信息请参阅材料安全数据表。

纯酶制剂的操作步骤

1. 在检测前将所有试剂平衡至室温。

2. 将每个样本的40 ?L分别加入96孔紫外滴定板的不同孔中。同时，每次检测需设置一个空白孔（不含GLO-1的样本缓冲液）。

3. 按每孔计算，将160 ?L检测缓冲液与8 ?L底物和8 ?L辅助底物混合，制备工作试剂。向每个孔中加入160 ?L工作试剂。

4. 在t = 0分钟和t = 10分钟时读取240 nm处的光密度。如果测定低GLO-1活性，可以使用更长的反应时间。

含蛋白质样本的操作步骤

1. 每个样本需要两个离心管：一个用于GLO-1反应，一个用于样本空白。将每个样本的40 ?L（血清样本应至少用检测缓冲液稀释2倍）分别加入两个Eppendorf管中。

2. 按每管计算，将160 ?L检测缓冲液与8 ?L底物和8 ?L辅助底物混合，制备工作试剂。

3. GLO-1反应。向GLO-1反应管中加入160 ?L工作试剂。在室温下孵育20分钟。

4. GLO-1反应的蛋白质沉淀。孵育20分钟后，向每个GLO-1反应管中加入70 ?L 4 M高氯酸，涡旋混合后在冰上冷却15分钟。（注意：蛋白质沉淀必须在冰上进行。）15分钟后，以14,000 rpm离心样本5分钟，将每个清晰上清液的200 ?L分别转移至96孔紫外滴定板的不同孔中。

5. 样本空白。向每个样本空白管中加入70 ?L 4 M高氯酸，涡旋混合后在冰上冷却15分钟。15分钟后，向每个样本空白管中加入160 ?L工作试剂。涡旋混合后在冰上冷却15分钟。（注意：在加入工作试剂之前，必须先对样本进行脱蛋白处理。）第二次冷却后，以14,000 rpm离心样本空白5分钟，将每个清晰上清液的200 ?L分别转移至96孔紫外滴定板的不同孔中。

6. 读取240 nm处的光密度。

所需材料（但未提供）

高氯酸（例如Sigma货号311413）、移液装置及配件、酶标仪。

实验示例

文献：

[1]. Davis, KA and Williams, GR. (1969) Glyoxalase I, a lyase or an oxidoreductive isomerase? Can. J. Biochem 47: 553-6.

[2]. Ditzen, C et al. (2006) Protein biomarkers in a mouse model of extremes in trait anxiety. Mol Cell Proteomics 5: 1914-20.

[3]. Strzinek, RA. et al. (1972) The purification and characterization of liver glyoxalase I from normal mice and from mice bearing a lymphosarcoma.Cancer Res 32:2359-64.

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。