BioAssay Systems CellQuanti MTT 细胞活力检测试剂盒实验步骤方案

研究细胞增殖和细胞活性需要准确量化细胞培养中活细胞的数量。因此，用于计算细胞活性的实验对于优化细胞培养条件、评估细胞生长因子和营养物质、发现新型抗生素和抗癌药物、评估环境污染物的毒性效应以及细胞介导的毒性以及研究程序性细胞死亡（凋亡）是必要的。

CellQuanti-MTT 实验试剂盒提供了一种便捷、灵敏、定量且可靠的实验方法，用于确定特定培养物中活细胞的数量。这种均相比色实验基于四氮唑盐MTT（一种淡黄色底物）被还原为甲臜（一种紫色染料）。这种细胞还原反应涉及吡啶核苷酸辅因子NADH/NADPH，并且仅由活细胞催化。甲臜产物在水中的溶解度较低，以紫色晶体形式存在。用溶解缓冲液溶解生成的甲臜可以方便地定量产物的形成。在550 - 620 nm处测量的产物颜色强度与培养物中活细胞的数量成正比。试剂盒中的试剂经过精心配制和优化，以提高灵敏度、实验的稳健性和自动化程度。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品CellQuanti MTT 细胞活力检测试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点： 

- 安全。非放射性实验。

- 灵敏且准确。低至950个细胞可以被准确定量。

- 便捷且高通量。“混合-孵育-测量”型实验。无需洗涤和试剂转移步骤。观察到的Z'因子为0.5及以上。可以轻松与高通量筛选（HTS）液体处理系统自动化配合使用。

应用： 

- 细胞增殖：细胞因子、生长因子、营养物质的影响。

- 细胞毒性与凋亡：评估毒性化合物、抗癌抗体、毒素、环境污染物等。

- 药物发现：毒性药物和抗癌药物的高通量筛选。

试剂盒内容： 

- 试剂：10 mL

- 溶解液：50 mL

- 对照试剂（产品编号# CTTX-050）：50 mg皂甙（单独出售）。

储存条件： 试剂盒在室温下运输。将试剂储存于-20°C。溶解液可在室温下保存。保质期：收到后12个月。

注意事项： 试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规注意事项。请参考材料安全数据表以获取详细信息。

实验步骤： 

1. 在透明底部的96孔组织培养板中铺板并培养细胞（每孔80 ?L）。实验可以在贴壁细胞或悬浮细胞上进行。每孔的细胞数量可以在1,000到80,000之间。体积可以在50到150 ?L之间，尽管在此示例中使用的是80 ?L。除了测试样本外，还必须包括不含细胞的培养基对照孔或用毒性试剂（如0.1%皂甙）处理的细胞对照孔。

2. 加入测试化合物和对照，并孵育细胞所需的时间（通常为过夜）。建议实验重复进行两次或三次。建议测试化合物和对照的体积为20 ?L，使用磷酸盐缓冲液（PBS）或培养基。对照试剂可以方便地用5 mL PBS（1%皂甙）复溶。

3. 将试剂恢复至室温。每孔加入15 ?L（每80 ?L细胞培养）试剂，并在37°C下孵育4小时。根据细胞培养的体积调整试剂的体积。

4. 每孔加入100 ?L溶解液。在室温下用轨道振荡器轻轻混合1小时。根据细胞培养的体积调整溶解液的体积。如果溶解液中出现沉淀，可将瓶子放入温水浴中或置于37°C，并摇晃以溶解沉淀。

5. 在吸光度平板读数器上测量每个孔的570 nm吸光度。甲臜染料的最大吸收波长在560到590 nm之间。如果需要，可以在第二天进行吸光度测量。在这种情况下，建议密封平板以减少蒸发。

示例：

文献参考：

1. Zhang, Y et al (2009). Estrogen inhibits glucocorticoid action via protein phosphatase 5 (PP5)-mediated glucocorticoid receptor dephosphorylation. J Biol Chem.284 (36):24542-52. Assay: Cell Viability in Human MCF-7 cells.

2. Oxelmark, E et al (2006). The cochaperone p23 differentially regulates estrogen receptor target genes and promotes tumor cell adhesion and invasion. Mol Cell Biol. 26(14):5205-13. Assay: Cell Viability in Human cell lines.

3. Gupta, V et al (2009). Fabrication and characterization of silk fibroinderived curcumin nanoparticles for cancer therapy. Int. J. Nanomedicine2009:4 115–122. Assay: Cell Viability in Human cells.

4. Cheng, H et al (2010). Transient receptor potential melastatin type 7 channel is critical for the survival of bone marrow derived mesenchymal stem cells. Stem Cells Dev. 19(9):1393-403. Assay: Cell Viability in Mouse mesenchymal stem cells.

5. Chen, TS et al (2010). Delineating biological pathways unique to embryonic stem cell-derived insulin-producing cell lines from their noninsulin-producing progenitor cell lines. Endocrinology 151(8):3600-10. Assay: Cell Viability in Mouse stem cells.

6. Desplats, PA et al (2008). Functional roles for the striatal-enriched transcription factor, Bcl11b, in the control of striatal gene expression and transcriptional dysregulation in Huntington’s disease. Neurobiol Dis.31(3):298-308. Assay: Cell Viability in Human cells. 

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。