BioAssay Systems 荧光素酶报告基因检测试剂盒：用于基因调节剂的高通量筛选

SuperLight?荧光素酶报告基因检测法基于在哺乳动物细胞、酵母或大肠杆菌细胞中荧光素酶表达的定量，使用荧光素和ATP作为底物。

反应会产生发光，这种发光可以方便地通过发光仪进行测量。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品荧光素酶报告基因检测试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点

-高灵敏度和宽检测范围：能够检测低至2飞克（fg）的荧光素酶和少至4个细胞。此外，发光强度在七个数量级范围内呈线性关系。

-与常规实验室和高通量筛选（HTS）格式兼容：检测可在试管或微孔板中进行，并可使用LJLAnalyst、Berthold发光仪、Top-Count、MicroBeta计数器、化学发光成像板读取器（CLIPR/LeadSeeker）等设备进行测量。检测试剂与所有液体处理系统兼容。

-快速便捷：均质“混合即测”检测法可在10分钟内完成荧光素酶水平的检测。优化组合的试剂系统允许单次添加步骤，并同时实现细胞裂解和检测。

-稳健且适用于高通量筛选：在96孔板和384孔板中观察到的Z'因子为0.6至0.8。可在HTS液体处理系统上轻松自动化。

应用

-基因调控：基因表达水平、启动子活性的特征、受体、转录因子和小分子对基因表达的调节。

-药物发现：用于基因调节剂的高通量筛选。

储存条件

试剂盒在常温下运输。将试剂储存于提供的棕色瓶中，置于-20°C，检测缓冲液储存于2-8°C。

保质期：收到后12个月。

本协议可在www.bioassaysys.com在线下载。

注意事项：试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规注意事项。请参阅材料安全数据表以获取详细信息。

操作步骤

SuperLight?荧光素酶报告基因检测法基于荧光素/荧光素酶反应过程中产生的生物发光。配制好的试剂经过优化，将细胞裂解和检测合并为一步。培养基中的酚红不会干扰此检测。技术说明中的所有数据均在含有酚红的培养基中获得。

重要提示：建议在检测缓冲液中新鲜配制试剂，尽管配制好的试剂在-20°C下储存时可稳定长达4周。

一般注意事项

-孵育时间：荧光素/荧光素酶反应和细胞裂解速度很快，因此在加入试剂后，哺乳动物细胞（例如HEK293、CHO）通常孵育2至10分钟就足够了。

-细胞数量：优化后的报告基因检测试剂对荧光素酶非常敏感（检测限2飞克），并且在七个数量级范围内呈线性关系。少至4个细胞可以被检测到，即使在96孔板中每孔多达80,000个细胞时，仍可观察到线性响应。为了优化检测，建议通过细胞稀释系列来确定每孔的最佳细胞数量。细胞可以是贴壁培养或悬浮培养。

-细胞裂解和混合：为了方便起见，将1体积的配制好的试剂加入到1体积的细胞中，可以实现充分混合。由于特制的缓冲液能够瞬间裂解哺乳动物细胞，因此无需额外混合。

示例： 

图1. SuperLight?荧光素酶检测法在384孔板中的线性关系。  

从空白对照中估算的检测限为2飞克（fg）。发光强度在2飞克到46纳克（ng）之间呈线性关系。

图2. 发射光与HEK293细胞数量之间的线性关系。  

在384孔板检测中，瞬时转染含有cAMP反应元件（CRE）荧光素酶报告基因构建物的HEK293细胞。检测限：4个细胞。

图3. 前列腺素E2（PGE2）和腺苷酸环化酶激活剂佛手柑素对CRE依赖性荧光素酶表达的上调。  

在瞬时转染含有cAMP反应元件（CRE）荧光素酶构建物的HEK293细胞中，PGE2的半数有效浓度（EC50）为0.15微摩尔（?M），佛手柑素的EC50为3.5微摩尔（?M）。

文献参考：

1. Cohen ME, et al (2011). Antibody against extracellular vaccinia virus (EV) protects mice through complement and Fc receptors. PLoS One.6(6):e20597.

2. Fuller CA, et al (2011). Shiga toxin subtypes display dramatic differences in potency. Infect Immun. 79(3):1329-37.

3. Kulkarni AA, et al (2010). Glycan encapsulated gold nanoparticles selectively inhibit shiga toxins 1 and 2. Bioconjug Chem. 21(8):1486-93.

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。