BioAssay Systems 蛋白质测定试剂盒-用于测定细胞或组织裂解液中的蛋白质浓度

蛋白质或肽被称为“生命的基石”，是生命科学中最重要的大分子之一。蛋白质测定是一种非常常见的操作。用于测量蛋白质或肽浓度的简单、直接且易于自动化的操作流程是非常理想的。BioAssay Systems的QuantiFluo?蛋白质检测试剂盒基于改进的邻苯二甲醛法。该试剂与蛋白质或肽中的伯胺反应，形成一种蓝色荧光产物，能够检测纳克级别的蛋白质。荧光强度（λex/em = 360/450 nm）与样本中的蛋白质浓度成正比。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品蛋白质测定试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点

- 快速且灵敏。检测过程仅需几分钟。以牛血清白蛋白（BSA）为标准，线性检测范围为1.3 - 1000 g/mL。

- 兼容裂解缓冲液。这种改进和优化的单一试剂可直接与各种裂解缓冲液配合使用。非常适合用于测定细胞或组织裂解液中的蛋白质浓度。

- 方便且高通量。均质的“混合-孵育-测量”型检测。无需洗涤和试剂转移步骤。可以轻松在高通量筛选（HTS）液体处理系统上自动化，每天可处理数千个样本。

应用领域

- 用于定量测定各种生物样本中的蛋白质。

试剂盒组成

- 试剂：20 mL

- 标准品：100 L（20 mg/mL BSA）

储存条件

- 本产品在室温下运输。长期储存时，请将试剂盒置于-20°C。有效期为收到后6个月。

注意事项

- 试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规注意事项。请参考材料安全数据表以获取详细信息。

96孔板读取器的检测步骤

注意：

1. 本检测与大多数洗涤剂、螯合剂和缓冲液成分兼容。如果可能的话，应避免使用含有伯胺的缓冲液（例如Tris、甘氨酸）。为了获得最佳结果，请在标准品和空白中包含与样本相同浓度的缓冲液。

2. 如果样本蛋白质浓度高于1000 g/mL，请用水稀释样本并重复检测。将结果乘以稀释倍数。

使用黑色平底96孔板。检测前，将所有试剂恢复至室温。

样本准备

- 培养的细胞可以直接在黑色培养板中进行检测。移除培养基，用1x磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤细胞3次。或者，细胞可以在改良的RIPA裂解缓冲液中均质化，该缓冲液包含：150 mM NaCl、5 mM EDTA（pH 8.0）、10 mM HEPES（pH 7.5）、1% NP-40、0.5% 脱氧胆酸钠、0.5% SDS。（由于伯胺会增加背景荧光，因此最好避免使用含有Tris或其他伯胺的RIPA缓冲液）。移除培养基后，加入足够的预热至95°C的裂解缓冲液以覆盖整个板（T-75为1-1.5 mL，T-25为500 L）。彻底覆盖细胞，然后用橡胶刮刀使贴壁细胞脱落。超声处理直至样本澄清，然后在95°C下加热10分钟。以1800 x g离心5分钟。如果存在沉淀物，则重复超声、加热和离心步骤，直至离心后的样本不再有沉淀物。

- 组织（20 mg）可以在200 L冰水或裂解缓冲液中均质化，然后以14,000 rpm离心5分钟。

- 当天未测量的样本可以冷冻保存于-80°C。

1. 标准品和样本

- 通过将10 L 20 mg/mL标准品与190 L H2O混合，制备1000 g/mL标准品预混液。按照表格所示，在H2O中稀释标准品预混液。将10 L标准品分别加入板的不同孔中。

- 将每个样本的10 L分别加入板的不同孔中。注意：如果细胞或组织裂解液样本在缓冲液中，则在所有标准稀释步骤中使用相同浓度的缓冲液代替H2O。

2. 检测

- 向所有孔中加入90 L试剂。立即轻拍板以混合。在室温下孵育5分钟。在360/450 nm处用酶标仪测量荧光强度。最好在混合后相同的时间间隔内读取所有样本的荧光强度。

注意：

1. 标准操作步骤中，样本与试剂的比例为1:9。通过使用更高的样本体积（例如1:1或5:1），可以实现更高的灵敏度。

2. 对于在384孔板中培养的细胞，向检测孔中加入40 L试剂。

示例：

文献参考：

1. Kutchai H, Geddis LM (1977). Determinations of protein in red cell membrane preparations by o-phthalaldehyde fluorescence. Anal Biochem. 77:315-9.

2. Robrish SA, et al (1978). The use of the o-phthalaldehyde reaction as asensitive assay for protein and to determine protein in bacterial cells and dental plaque. Anal Biochem. 84:196-204.

3. Joys TM, Kim H (1979). o-Phthalaldehyde and the fluorogenic detection of peptides. Anal Biochem. 94:371-7.

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。