BioAssay Systems 平行人工膜渗透性测定(PAMPA)试剂盒操作流程

膜通透性是评估化合物作为潜在药物候选物的一个重要特性。药物通常需要穿过细胞膜才能到达其作用靶点，这使得化合物被动穿过这些膜的能力成为需要评估的一个重要特性。膜通透性可以通过基于细胞的方法来评估，然而，这些方法往往成本高昂且耗时。平行人工膜通透性实验（PAMPA）为研究人员提供了一种快速、廉价的测试化合物通透性的方法。

BioAssay Systems 的 PAMPA-096 套装 提供了进行胃肠道（GI）膜通透性平行人工膜通透性实验所需的所有必要组件。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品平行人工膜渗透性测定(PAMPA)试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点：

-便捷：包含运行PAMPA板所需的所有设备。

-简单且低成本：操作流程简单易懂，比基于细胞的通透性实验更具性价比。

-高通量：可轻松自动化为高通量96孔板实验，每天可处理数千个样本。

应用：

-直接实验：评估测试化合物的膜通透性。

-储存条件：该套装在室温下运输。收到后，将通透性对照品、十二烷和干燥卵磷脂储存于-20°C；将供体板、受体板和工作托盘储存于室温。保质期：自收到之日起12个月。

-注意事项：试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规预防措施。详细信息请参阅材料安全数据表。

-试剂准备：在实验前将所有组件平衡至室温。打开前需短暂离心试管。

操作流程：

1.制备卵磷脂溶液：通过将干燥卵磷脂重新悬浮在750uL十二烷中，制备4%的卵磷脂溶液。反复吸吹（约100次）直至所有干燥卵磷脂溶解；可使用涡旋或超声辅助溶解。如果需要在较低浓度的卵磷脂下运行PAMPA，可以进一步稀释卵磷脂至所需百分比。或者，也可以使用您自己选择的脂质混合物。应选择脂质溶液及其浓度以最好地模拟待评估的目标屏障。

2.制备测试化合物储备液：为所有待测化合物制备10mM的DMSO储备液。提供的通透性对照品为10mM的DMSO溶液。

3.使用96孔板的实验流程：

-在单独的离心管中，制备500uL的500uM测试化合物溶液：将25uL10mM的测试化合物（溶于DMSO）与475uLPBS混合。如果使用通透性对照品，也需将其稀释至500uM：将25uL通透性对照品与475uLPBS混合。

-在单独的试管中，为每个测试化合物和对照品制备200uM的平衡标准品：将80uL500uM的测试化合物或对照品与120uLPBS混合。如果化合物能够透过膜并达到完全平衡，200uM将是供体孔和受体孔中溶液的最终浓度。接下来，在另一个试管中，将5uLDMSO与245uLPBS混合，制备空白对照。将平衡标准品和空白对照留待次日分析。

-向受体板的孔中加入300uLPBS。

-在供体板仍置于托盘中时，直接将5uL4%卵磷脂十二烷溶液加入供体板的孔膜中。注意不要用移液管尖刺破膜。

-将每个500uM测试化合物和500uM通透性对照品分别加入供体板的双孔中。

-注意：我们建议所有实验变量至少进行双份实验。

-小心地将供体板放入受体板的孔中。在室温或37°C下孵育18小时或所需的孵育时间（例如16-24小时）。

-小心地移除供体板，并收集受体板孔中的液体用于分析。这将被称为受体溶液。

-在紫外板（货号P96UV）的孔中分别加入100uL受体溶液、每个测试化合物和通透性对照品的平衡标准品，以及100uL空白对照。

-以10nm为间隔，从200nm到500nm读取吸光度光谱，以确定测试化合物的峰值吸光度。空白对照用于确认峰值是由于测试化合物而非溶液中的DMSO。高通透性、中等通透性和低通透性对照品的峰值吸光度分别为280nm、270nm和270nm。

-注意：或者，也可以使用高效液相色谱（HPLC）、质谱（MS）或其他定量方法进行分析。

所需但未提供的材料：

移液装置、DMSO、PBS、紫外板（货号P96UV）以及能够进行吸光度光谱检测的吸光度板读取器。

实例：

通透性对照品PAMPA使用PBS、4%卵磷脂膜，在25°C下孵育18小时。

文献：

1. Wohnsland, F., Faller, B. (2001). High-throughput Permeability pH Profile and High-throughput Alkane/Water Log P With Artificial Membranes. J Med Chem 44: 923-930.

2. Kansy, M., et al (1998). Physiochemical High Throughput Screening:Parallel Artificial Membrane Permeation Assay in the Description of Passive Absorption Processes. J Med Chem 41: 1007-1010.

3. Di, Li., et al (2002). High throughput artificial membrane permeability assay for blood—brain barrier. J Med Chem 38: 223-232. 

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。