膜通透性是评估化合物作为潜在药物候选物的一个重要特性。药物通常需要穿过细胞膜才能到达其作用靶点,这使得化合物被动穿过这些膜的能力成为需要评估的一个重要特性。膜通透性可以通过基于细胞的方法来评估,然而,这些方法往往成本高昂且耗时。平行人工膜通透性实验(PAMPA)为研究人员提供了一种快速、廉价的测试化合物通透性的方法。
BioAssay Systems 的 PAMPA-096 套装 提供了进行胃肠道(GI)膜通透性平行人工膜通透性实验所需的所有必要组件。
作为BioAssay Systems在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品平行人工膜渗透性测定(PAMPA)试剂盒。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
产品名称 | 货号 | 详情 |
平行人工膜渗透性测定(PAMPA)试剂盒 | BAS-PAMPA-096 | 查看 |
主要特点:
-便捷:包含运行PAMPA板所需的所有设备。
-简单且低成本:操作流程简单易懂,比基于细胞的通透性实验更具性价比。
-高通量:可轻松自动化为高通量96孔板实验,每天可处理数千个样本。
应用:
-直接实验:评估测试化合物的膜通透性。
-储存条件:该套装在室温下运输。收到后,将通透性对照品、十二烷和干燥卵磷脂储存于-20°C;将供体板、受体板和工作托盘储存于室温。保质期:自收到之日起12个月。
-注意事项:试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规预防措施。详细信息请参阅材料安全数据表。
-试剂准备:在实验前将所有组件平衡至室温。打开前需短暂离心试管。
操作流程:
1.制备卵磷脂溶液:通过将干燥卵磷脂重新悬浮在750uL十二烷中,制备4%的卵磷脂溶液。反复吸吹(约100次)直至所有干燥卵磷脂溶解;可使用涡旋或超声辅助溶解。如果需要在较低浓度的卵磷脂下运行PAMPA,可以进一步稀释卵磷脂至所需百分比。或者,也可以使用您自己选择的脂质混合物。应选择脂质溶液及其浓度以最好地模拟待评估的目标屏障。
2.制备测试化合物储备液:为所有待测化合物制备10mM的DMSO储备液。提供的通透性对照品为10mM的DMSO溶液。
3.使用96孔板的实验流程:
-在单独的离心管中,制备500uL的500uM测试化合物溶液:将25uL10mM的测试化合物(溶于DMSO)与475uLPBS混合。如果使用通透性对照品,也需将其稀释至500uM:将25uL通透性对照品与475uLPBS混合。
-在单独的试管中,为每个测试化合物和对照品制备200uM的平衡标准品:将80uL500uM的测试化合物或对照品与120uLPBS混合。如果化合物能够透过膜并达到完全平衡,200uM将是供体孔和受体孔中溶液的最终浓度。接下来,在另一个试管中,将5uLDMSO与245uLPBS混合,制备空白对照。将平衡标准品和空白对照留待次日分析。
-向受体板的孔中加入300uLPBS。
-在供体板仍置于托盘中时,直接将5uL4%卵磷脂十二烷溶液加入供体板的孔膜中。注意不要用移液管尖刺破膜。
-将每个500uM测试化合物和500uM通透性对照品分别加入供体板的双孔中。
-注意:我们建议所有实验变量至少进行双份实验。
-小心地将供体板放入受体板的孔中。在室温或37°C下孵育18小时或所需的孵育时间(例如16-24小时)。
-小心地移除供体板,并收集受体板孔中的液体用于分析。这将被称为受体溶液。
-在紫外板(货号P96UV)的孔中分别加入100uL受体溶液、每个测试化合物和通透性对照品的平衡标准品,以及100uL空白对照。
-以10nm为间隔,从200nm到500nm读取吸光度光谱,以确定测试化合物的峰值吸光度。空白对照用于确认峰值是由于测试化合物而非溶液中的DMSO。高通透性、中等通透性和低通透性对照品的峰值吸光度分别为280nm、270nm和270nm。
-注意:或者,也可以使用高效液相色谱(HPLC)、质谱(MS)或其他定量方法进行分析。
所需但未提供的材料:
移液装置、DMSO、PBS、紫外板(货号P96UV)以及能够进行吸光度光谱检测的吸光度板读取器。
实例:
通透性对照品PAMPA使用PBS、4%卵磷脂膜,在25°C下孵育18小时。
文献:
1. Wohnsland, F., Faller, B. (2001). High-throughput Permeability pH Profile and High-throughput Alkane/Water Log P With Artificial Membranes. J Med Chem 44: 923-930.
2. Kansy, M., et al (1998). Physiochemical High Throughput Screening:Parallel Artificial Membrane Permeation Assay in the Description of Passive Absorption Processes. J Med Chem 41: 1007-1010.
3. Di, Li., et al (2002). High throughput artificial membrane permeability assay for blood—brain barrier. J Med Chem 38: 223-232.
BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司,专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒,产品种类齐全,主要用于科学研究和生物医药开发,以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验,已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括:1.血液尿液化学;2.酶活性测定;3.能量代谢;4.氧化应激;5.高通量HTS试剂;6.阴阳离子检测。
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