L-肉碱存在于大多数哺乳动物、植物和某些细菌中。L-肉碱最重要的作用是将长链脂肪酸从细胞质转运到线粒体中进行脂肪酸氧化。BioAssay Systems 的方法提供了一种简单且高通量的L-肉碱检测方法。在此检测中,多步反应产生H2O2,H2O2与特定染料反应生成粉红色产物。在570nm处的吸光度或在λex/em = 530/585nm处的荧光强度与样品中L-肉碱的浓度成正比。
作为BioAssay Systems在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品EnzyChrom l-肉碱测定试剂盒。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
产品名称 | 货号 | 详情 |
EnzyChrom l-肉碱测定试剂盒 | BAS-ELCR-100 | 查看 |
主要特点
灵敏:使用10 uL样本。检测范围:比色法检测为12 1000 uM,荧光法检测为1 100 uM L-肉碱。
便捷:室温下的“混合 孵育 读取”程序可轻松自动化,每天可进行数千个样本的高通量检测。
应用
检测:尿液、血清、血浆、细胞裂解液、组织裂解液和食品(如牛奶)中的L-肉碱。
试剂盒组成
检测缓冲液:10 mL
染料试剂:120 uL
酶A:干粉
酶B:100 uL
酶C:100 uL
标准品:50 uL
底物混合液:400 uL
储存条件
试剂盒在运输过程中使用冰袋包装。将所有组分存放在-20℃。有效期:自收到之日起六个月。
注意事项
试剂仅供研究使用。使用试剂时需遵循实验室试剂的常规安全措施。请参阅安全数据表以获取详细信息。
操作步骤
试剂准备
通过向酶A管中加入120 uL去离子水复溶酶A。通过上下移液确保酶A完全溶解,并在室温下孵育15分钟。将复溶后的酶A存放在-20℃,并在2个月内使用。
样本准备
血清、血浆和牛奶应通过高氯酸:氢氧化钾沉淀法(见下文)进行澄清。血清和血浆应使用内标物稀释不超过1:5。细胞裂解液可直接检测。牛奶可以直接测量,也可以使用内标物。
对于高氯酸:氢氧化钾澄清法,向100 uL样本中加入10 uL 60%的高氯酸,充分混合后以14,000 rpm离心5分钟。向100 uL上清液中加入40 uL 2 M KOH,置于冰上沉淀,然后以14,000 rpm离心2分钟收集上清液。稀释因子n为1.54。
注意:含有巯基(SH)的试剂(例如β-巯基乙醇或二硫苏糖醇,> 5 uM)、叠氮化钠、EDTA和十二烷基硫酸钠已知会干扰此检测,应在样本准备中避免使用。
实例
PANC-1细胞裂解液样本直接在0.99 mg/mL的蛋白质浓度下进行检测。计算出的L-肉碱浓度为23.2 ± 5.2 nmol/mg总蛋白。人血清和全脂牛奶使用高氯酸:氢氧化钾沉淀法和内标物方法进行检测。L-肉碱浓度分别为46.3 ± 5.9 uM(人血清)和313.7 ± 85.1 uM(全脂牛奶)。
文献参考:
1. Pekala J, et al. (2011). L-carnitine-metabolic functions and meaning in human life. Curr. Drug Metab. 12:667-78
2. Almannai M, et al. (1980). Carnitine inborn errors of metabolism.Molecules. 24: 3251-3267.
3. Longo N, et al. (2016). Carnitine transport and fatty acid oxidation.Biochim Biophys Acta. 1863:2422-35.
BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司,专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒,产品种类齐全,主要用于科学研究和生物医药开发,以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验,已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括:1.血液尿液化学;2.酶活性测定;3.能量代谢;4.氧化应激;5.高通量HTS试剂;6.阴阳离子检测。
作为BioAssay Systems在中国区域的代理,艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。
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