蛋白质磷酸化在细胞内调节蛋白质活性中发挥着关键作用。已知许多蛋白激酶和磷酸酶参与多种信号转导途径。在生命科学研究和药物发现中,能够监测这些信号转导途径、靶蛋白磷酸化状态以及药物效应的快速检测方法是十分理想的。
糖原合成酶激酶3-α(GSK3A,Gsk3a,2700086H06Rik,EC2.7.1.37)是一种多功能蛋白丝氨酸激酶,涉及对糖原合成酶和多种转录因子等多种调节蛋白的控制。它还在WNT信号通路和磷脂酰肌醇3-激酶(尤其是PIK3CG)信号通路中发挥作用。BioAssaySystems的GSK3A(S21)磷酸化ELISA试剂盒提供了一种快速、灵敏的检测方法,用于测量培养细胞中的磷酸化蛋白pGSK3A(S21),并将磷酸化水平与同一孔中的总蛋白含量进行标准化。这种简单高效的检测方法无需细胞裂解液制备,可用于研究潜在信号通路以及抑制剂、siRNA或激活剂对通路的影响。在此检测中,生长在96孔板中的细胞经过固定和通透处理。使用特异性一抗检测GSK3A(S21)的磷酸化,随后使用辣根过氧化物酶(HRP)偶联的二抗和荧光底物,以及用于测量同一孔中总蛋白的荧光试剂。
作为BioAssay Systems在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品EnzyFluo 人/小鼠GSK3A(S21)磷酸化ELISA试剂盒。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
产品名称 | 货号 | 详情 |
EnzyFluo 人/小鼠GSK3A(S21)磷酸化ELISA试剂盒 | BAS-EGSK3A-100 | 查看 |
主要特点
改进版:总检测时间从标准的21小时缩短至6.5小时(实际操作时间2.5小时)。
简单便捷:细胞直接在96孔板中培养,无需细胞裂解。
准确且高通量:将蛋白磷酸化水平与同一孔中的总细胞蛋白进行标准化,极大地减少了孔间差异。可作为高通量96孔板检测方法,每天可处理数千个样本。
应用
-测定完整细胞中GSK3A(S21)的磷酸化状态。
-评估激活剂、抑制剂、siRNA等对信号通路的调节作用。
-已测试物种:人、小鼠、大鼠和犬。
试剂盒内容
-洗涤缓冲液:25mL
-封闭缓冲液:25mL
-蛋白染色液:6mL
-染料试剂:120uL
-Ab1:10uL
-Ab2(gM-HRP):10uL
储存条件
-本试剂盒在运输过程中使用冰袋包装。收到后,请将所有试剂储存于-20°C。这些试剂的保质期约为收到后6个月。
注意事项
-试剂仅供研究使用。使用这些试剂时,请遵循实验室试剂的常规注意事项。请参阅材料安全数据表以获取详细信息。
NIH3T3细胞中GSK3A(S21)磷酸化的诱导
-将3×104个NIH3T3细胞接种于100?L培养基中,放入96孔板。在37℃下孵育过夜后,用50ng/mL的PDGFbb在无血清培养基中处理细胞。使用EGSK3A-100试剂盒检测GSK3A(S21)的磷酸化。
文献参考:
1. Cohen, P. (2002). The origins of protein phosphorylation. Nature Cell Biology. 4 (5): E127–130.
2. Smoly, I. et al (2017). An asymmetrically balanced organization of kinases versus phosphatases across Eukaryotes determines their distinct impacts". PLOS Computational Biology. 13 (1): e1005221.
3. Vlastaridis, P. et al (2017). Estimating the total number of phosphoproteins and phosphorylation sites in eukaryotic proteomes.GigaScience. 6 (2): 1–11
BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司,专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒,产品种类齐全,主要用于科学研究和生物医药开发,以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验,已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括:1.血液尿液化学;2.酶活性测定;3.能量代谢;4.氧化应激;5.高通量HTS试剂;6.阴阳离子检测。
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