谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)是一类具有过氧化物酶活性的酶家族,其主要生物学作用是保护机体免受氧化损伤。它通过清除细胞内的游离过氧化物,帮助防止细胞膜的脂质过氧化。GPX在谷胱甘肽还原酶(GR)的协同作用下催化以下反应:
简单、直接且高通量的GPX活性测定方法应用广泛。BioAssay Systems改进的测定方法直接测量酶偶联反应中NADPH的消耗量。在340 nm处测量的吸光度降低与样品中的酶活性成正比。
作为BioAssay Systems在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品【干冰】EnzyChrom 谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
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【干冰】EnzyChrom 谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒 | BAS-EGPX-100 | 查看 |
主要特点
灵敏且准确。使用10 uL样品。线性检测范围:40到800 U/L GPX活性。
应用
直接测定:生物样本中的GPX活性。
药物发现/药理学:药物对GPX活性的影响。
试剂盒组成(96孔板,100次检测)
检测缓冲液:25 mL
谷胱甘肽还原酶(GR):250 uL
谷胱甘肽:干燥
NADPH:干燥
校准液:500 uL
过氧化物溶液:50 uL
储存条件
试剂盒在运输过程中使用冰袋包装。收到后请将所有组分储存于-20°C。有效期:收到后6个月,复溶后3周。
注意事项
试剂仅供研究使用。使用试剂时,请遵循实验室试剂的常规操作注意事项。详细信息请参考材料安全数据表(MSDS)。
样本准备
所有样本应澄清且无任何浑浊或颗粒。液体样本(例如非溶血血清、血浆)可以直接检测。将组织(10 mg)或细胞(10?)在200 uL冷PBS中匀浆,然后以14,000 rpm离心10分钟以沉淀杂质。使用澄清的上清液进行检测。如果不能立即检测,将上清液在-80°C下冷冻(稳定1个月)。
计算方法
使用4分钟时的吸光度(OD)值进行NADPH标准品测定。从标准品值中减去空白值(#4)。将ΔOD值与标准品浓度绘制标准曲线,并确定标准曲线的斜率。计算样品的ΔOD值(ΔODS = OD0- OD4)和背景对照的ΔOD值(ΔODB = OD0 - OD4)。计算样品的GPX活性:
其中,1000用于将毫摩尔转换为微摩尔,n为样品稀释因子。
注意:如果计算出的GPX活性高于800 U/L,或者样本孔的初始OD340nm值大于1.5,请用去离子水(dH2O)稀释样本并重新检测。将结果乘以稀释因子。
单位定义:一个单位是指在pH 7.6和室温下,每分钟产生1微摩尔GSSG的GPX量。
文献参考:
1. Medina-Leendertz, S., et al. (2018). Melatonin decreases oxidative stress in Drosophila melanogaster exposed to manganese.Investigacion Clinica, 59(3), 230-241. Assay: Glutahione peroxidase in D. melanogaster tissues.
2. Hirahara, I et al. (2020). Hypermetabolism of glutathione, glutamate and ornithine via redox imbalance in methylglyoxal-induced peritoneal injury rats. Journal of Biochemistry, 167(2), 185-194.
3. Vieira da Silva, I et al. (2021). Glutamine and cystine-enriched diets modulate aquaporins gene expression in the small intestine of piglets. PloS One, 16(1), e0245739.
BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司,专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒,产品种类齐全,主要用于科学研究和生物医药开发,以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验,已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括:1.血液尿液化学;2.酶活性测定;3.能量代谢;4.氧化应激;5.高通量HTS试剂;6.阴阳离子检测。
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