PDE10A1检测试剂盒是一种荧光偏振(FP)均相384孔板检测试剂盒,专为筛选和分析PDE10A1(磷酸二酯酶10A1)抑制剂而设计。该检测利用了一种特定的荧光磷酸盐结合纳米颗粒。试剂盒包含足够的纯化重组PDE10A1、荧光探针、PDE检测缓冲液、结合剂和稀释液,用于400次反应。
检测使用了标记有荧光素的环状鸟苷酸单磷酸(cAMP-FAM用于PDE10A1),其中磷酸基团参与环状核苷酸的构成。这是一种非常小的分子,旋转速度快(低FP)。PDE10A1催化环状核苷酸中磷酸二酯键的水解,释放出磷酸基团。在第二步中,自由的磷酸基团被特定的磷酸结合纳米珠(结合剂)识别,形成一个大复合物,其运动受到限制(高FP)。FP与PDE10A1活性成正比。
在200 nM FAM-环状-3',5'-AMP底物存在的情况下,PDE10A1与逐渐增加浓度的罂粟碱共同孵育。使用Tecan M1000荧光微孔板读取器测量荧光偏振。结果以活性百分比表示,其中在没有抑制剂(阳性对照)的情况下,FP被设定为100%。
艾美捷BPS Bioscience-PDE10A1检测试剂盒:
货号:60385
同义词:PDE10-A1、PDE
试剂盒格式:荧光偏振
物种:人类
提供形式:PDE10A1抑制剂筛选检测试剂盒采用方便的384孔板格式,包括纯化的PDE10A1酶、荧光标记的PDE10A1底物(cAMP)、结合剂和用于400次酶反应的PDE检测缓冲液。
所需材料但未提供:
可调节微量移液器及无菌吸头
旋转或摇动平台
能够测量荧光偏振的荧光微孔板读取器(激发波长λex=470 nm(5 nm带宽),发射波长λem=528 nm(10 nm带宽))
储存/稳定性:按照指导储存时,该检测试剂盒在收到后6个月内可达到最佳性能。
应用:用于研究酶动力学,以及在高通量筛选(HTS)应用中筛选小分子抑制剂以进行药物发现。
运输温度:-80°C(干冰)
仅供研究使用
禁忌事项:
检测中DMSO的最终浓度不应超过1%。
具有荧光特性的化合物可能会根据其光谱激发和发射特性干扰结果。
建议单独测试化合物,以确定其是否可能对检测结果产生潜在干扰。
检测结果示例:
图:在200 nM FAM-环状-3', 5'-AMP底物存在的情况下,PDE10A1与逐渐增加浓度的罂粟碱共同孵育。使用Tecan M1000荧光微孔板读取器测量荧光偏振。结果以活性百分比表示,其中在没有抑制剂(阳性对照)的情况下,荧光偏振(FP)被设定为100%。
文献参考:
Nishi A., et al., 2010 Pharmacol. Sci. 114:6-16.
Omori K., et al., 2007 J. Circulation Res. 100:309-327.
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