BioAssay Systems【干冰】EnzyFluo 胶原蛋白检测试剂盒操作步骤说明

胶原蛋白是结缔组织的关键结构蛋白，也是哺乳动物体内最丰富的蛋白质。它有许多不同种类和形式，其中I型到V型最为常见。除了在体内发挥的关键作用外，它还有许多医学应用，例如在重建手术（包括骨骼和皮肤移植）中的使用。由于其抗衰老和皮肤修复特性，它还被广泛用于化妆品。目前用于定量检测胶原蛋白的检测方法从需要使用酸和碱进行广泛水解处理到使用昂贵的抗体和复杂的协议不等。

BioAssaySystems的胶原蛋白检测试剂盒提供了一种非常简单、安全且灵敏的方法来定量检测样本中的胶原蛋白。在此程序的第一步中，样本中的胶原蛋白被酶消化成肽段。随后，含有N端甘氨酸的肽段与染料试剂反应形成荧光复合物。该产物的荧光强度在λex/em=375/465nm处测量，与样本中的胶原蛋白浓度成正比。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品【干冰】EnzyFluo 胶原蛋白检测试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点

-安全。非放射性检测。

-灵敏且准确。使用20uL样本。96孔板检测的线性检测范围为2ug/mL到50ug/mL胶原蛋白。

-便捷且高通量。“加样-混合-读取”型检测。无需洗涤和试剂转移步骤。可轻松自动化，每天可处理数千个样本。

应用

-直接检测：生物样本和化妆品中的胶原蛋白。

试剂盒组成（96孔板，100次检测）

-染料试剂：5mL

-胶原蛋白标准品：40uL（3mg/mL）

-缓冲液：5mL

-显色剂：1mL

-消化酶：70uL

储存条件：试剂盒在运输过程中使用冰袋冷藏。收到后，请将试剂盒组分储存于-20°C。有效期：自收到之日起6个月。

注意事项：试剂仅供研究使用。打开前短暂离心试剂管。检测前将所有组分恢复至室温。使用试剂时，请遵循实验室试剂的常规操作注意事项。详细信息请参考材料安全数据表。

操作步骤：

样本准备：此检测针对低水平胶原蛋白的检测进行了优化。由于检测的灵敏度和胶原蛋白的丰富性，通常需要较大的稀释倍数才能将样本置于本试剂盒的线性检测范围内。强烈建议进行系列稀释以确定某种样本的最佳稀释倍数。生物液体样本（如血清、细胞裂解液、组织裂解液）首先离心以去除任何颗粒。可能需要进行系列稀释以确定每种样本在此检测中的最佳稀释倍数。

左图：96孔板检测中的标准曲线

右图：有（+）和无（-）消化酶的胶原蛋白样本。

A）30ug/mL胶原蛋白标准品。

B）EssentialWholesaleMarineCollagen，稀释250倍。

C）大鼠血清，稀释20倍（2.7mg/mL蛋白质）。

D）牛血清，稀释10倍（7.0mg/mL蛋白质）。

E）人血清，稀释20倍（3.14mg/mL蛋白质）。

文献参考：

1. Inoue, Y., et al (2012). Accelerating effect of soy peptides containing collagen peptides on type I and III collagen levels in rat skin. Biosci Biotechnol Biochem 76(8): 1549-51.

2. Kinoshita, J., et al (2010). Type IV collagen levels are elevated in the serum of patients with peritoneal dissemination of gastric cancer.Oncol Lett 1(6): 989-994.

3. Seo, H.Y., et al. (2014). Phospholipase D1 decreases type I collagen levels in hepatic stellate cells via induction of autophagy. Biocehm Biophys Res Commun 449(1): 38-43.

4. Di Lulio, G.A., et al (2002). Mapping the ligand-binding sites and disease associated mutations on the most abdundant protein in the human, type I collagen. J Biol Chem 277 (6): 4223-4231. 

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。