植酸酶催化肌醇-(1,2,3,4,5,6)-六磷酸(植酸或IP?)的磷酸酯键水解,从而释放肌醇和磷酸。植酸是植物中磷酸的主要储存形式。植酸酶在小麦和大麦等谷物中含量丰富,单胃动物对植酸的水解是动物营养的一个关键方面。此外,单胃动物缺乏植酸酶可能导致未消化的植酸使过多的磷渗入环境。
能够简单、直接且适合自动化的植酸酶活性检测程序是非常理想的。BioAssay Systems 的 QuantiChrom? 植酸酶检测试剂盒基于我们的孔雀石绿磷酸盐检测法(POMG-25H)。在 620 nm 处测量的吸光度与植酸释放的磷酸量成正比。
作为BioAssay Systems在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品胃蛋白酶抑制剂测定试剂盒。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
产品名称 | 货号 | 详情 |
胃蛋白酶抑制剂测定试剂盒 | BAS-DPHT-100 | 查看 |
主要特点:
- 简单:无需混合复杂的检测试剂。
- 高灵敏度和宽检测范围:在 96 孔板检测中,植酸酶的检测范围为 0.01 至 20 U/L。
- 快速便捷:均相“混合-测量”检测法可在 60 分钟内定量植酸酶活性。
应用:
- 在农业和生物样本中直接检测植酸酶活性。
试剂盒内容(96 孔板 100 次检测):
- 检测缓冲液(pH 5.5):10 mL
- POMG 试剂 A:2.5 mL
- 植酸:120 uL
- POMG 试剂 B:120 uL
- 标准品:120 uL(1 mM 磷酸)
储存条件:试剂盒在室温下运输。收到后将所有组分储存于 4°C。保质期:收到后 12 个月。
注意事项:试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规注意事项。请参阅材料安全数据表以获取详细信息。
操作步骤:
- 样本准备:在制备植酸酶提取物时,必须避免使用含有磷酸盐的洗涤剂和缓冲液,因为该检测对游离磷酸盐极为敏感。如果样本中含有磷酸盐,建议使用 10kDa NMWL 膜滤器(例如 Amicon? Ultra 0.5 mL Ultracel 或类似产品)至少冲洗 3 次以去除磷酸盐。
- 工作试剂准备:每个孔需要 75 uL 植酸工作试剂(WR)。通过将每孔的 1 uL 植酸原液与 80 uL 检测缓冲液混合来制备足够量的 WR。
- 显色试剂准备:每个孔需要 20 uL 显色试剂。通过将 100 体积的 POMG 试剂 A 与 1 体积的 POMG 试剂 B 混合来制备足够量的显色试剂(例如 1 mL 试剂 A 和 10 uL 试剂 B)。工作试剂在室温下至少稳定 1 天。
重要事项:
1. 所有试剂在使用前必须平衡至室温。
2. 在每次检测前,重要的是要检查所有酶制剂和检测缓冲液中是否含有游离磷酸盐。可以通过将 20 uL 显色试剂加入 80 uL 样本溶液中来方便地进行检查。30 分钟时的空白吸光度(620 nm)应低于 0.2。如果吸光度高于 0.2,则需检查水中的磷酸盐水平。
3. 在磷酸盐(>100 uM)、蛋白质和金属的高浓度下可能会发生沉淀。如果发生沉淀,则在 H?O 中对样本进行系列稀释,运行检测,并根据没有沉淀的孔选择稀释倍数。使用适当稀释的样本重复检测。
4. 对于活性未知的酶样本,建议在检测缓冲液中进行系列稀释,以使活性处于检测范围内。高浓度的蛋白质可能会通过沉淀干扰显色反应。
实例:
小麦植酸酶活性的时间过程(室温):按照协议描述进行反应,每个时间点分别进行双份反应。
小麦植酸酶活性的稀释系列(室温):绘制了 30 分钟初始速率与酶样本(ug/孔)的关系图。
文献:
1. Dionisio, G., et al (2011) Cloning and Characterization of Purple Acid Phosphatase Phytases from Wheat, Barley, Maize, and Rice. Plant Physiol. 156:1087.
2. Madsen, C. K. and Brinch-Pedersen, H. (2019) Molecular Advances on Phytases in Barley and Wheat. Int. J. Mol. Sci. 20:2459
3. Nakano, T., et al (1999) Purification and Characterization of Phytase from Bran of Triticum aestivum L. cv. Nourin #61. Food Sci. Technol.Res. 5(1): 18
BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司,专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒,产品种类齐全,主要用于科学研究和生物医药开发,以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验,已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括:1.血液尿液化学;2.酶活性测定;3.能量代谢;4.氧化应激;5.高通量HTS试剂;6.阴阳离子检测。
作为BioAssay Systems在中国区域的代理,艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。
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