BioAssay Systems 胃蛋白酶抑制剂测定试剂盒- 安全：非放射性检测

胃蛋白酶（EC 3.4.23.1）是一种消化性丝氨酸蛋白酶，能够在许多真核生物和原核生物中水解膳食蛋白质。胃蛋白酶主要在芳香族氨基酸苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸的氨基侧切断肽链。BioAssay Systems 的 QuantiFluo? 胃蛋白酶抑制剂检测试剂盒使用了一种荧光素异硫氰酸酯（FITC）标记的合成底物。荧光素标记的荧光被高度猝灭。当样本中的胃蛋白酶对底物进行消化时，底物被分解成更小的肽段，从而消除了荧光猝灭。通过在 λex/em = 485/530 nm 处测量 FITC 标记片段的荧光或荧光偏振（FP），抑制率通过荧光强度的降低来确定。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品胃蛋白酶抑制剂测定试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点：

- 安全：非放射性检测。

- 均相且便捷：均相“混合-孵育-测量”型检测。无需洗涤和试剂转移步骤。

- 稳健且高通量：可轻松自动化，每天检测数千个样本。稳健的检测方法，Z’因子大于 0.7。

应用：

- 用于评估药物和筛选胃蛋白酶蛋白酶的潜在抑制剂。

试剂盒内容（96 孔板 100 次检测）：

- 检测缓冲液：20 mL

- 底物：100 uL

储存条件：试剂盒在室温下运输。收到后将所有组分储存于 -20°C。保质期：收到后 6 个月。

注意事项：试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规注意事项。请参阅材料安全数据表以获取详细信息。

操作步骤：

- 在检测前，将所有组分平衡至室温。该检测基于动力学反应。为确保相同的孵育时间，向样本中添加工作试剂的操作应迅速，混合应简短但充分。建议使用多通道移液器。检测可在室温下进行。注意：本试剂盒不包含酶或抑制剂。客户需自行提供所需的酶或抑制剂。

- 样本准备：

- 为了降低自消化速度，纯胃蛋白酶溶液可在酸性条件下（10 mM HCl，pH 2.0）长期储存于 -80°C。在检测前，准备足够的 10 mM HCl（例如 10 mL），用于 96 孔板的所有测试孔。将纯化的胃蛋白酶稀释于 HCl 溶液中。胃蛋白酶应置于冰上，并尽快使用。将测试化合物溶解于选定的溶剂中（例如 DMSO）。建议首先测试溶剂对所选酶的耐受性。对于猪胃蛋白酶，检测中 DMSO 的最终浓度应小于 2%。为了获得最佳的胃蛋白酶活性条件，建议将化合物溶解于酸性溶剂（例如 10 mM HCl，pH 2.0）中。

- 96 孔板中的抑制剂筛选：

1. 将 30 uL 的 27 U/L 胃蛋白酶（反应中的最终浓度为 5.4 U/L）分别转移至黑色平底 96 孔板的各个孔中。另外，分别准备 30 uL 的胃蛋白酶（“对照”）和 30 uL 的 10 mM HCl（“空白”）孔。

2. 向对照孔和空白孔中加入 10 uL 溶解测试化合物的缓冲液溶剂。例如，如果测试化合物溶解于含有 0.1% DMSO 的 10 mM HCl 中，则向这些孔中加入该溶液 10 uL。

3. 向其余含有酶的孔中加入 10 uL 测试化合物（所需浓度）。轻拍平板以混合，并在室温下孵育 15 分钟，使抑制剂阻断胃蛋白酶活性。

4. 通过将 0.5 uL 底物和 12 uL 10 mM HCl 混合，为所有孔准备足够量的工作试剂。向所有孔中加入 10 uL 工作试剂。轻拍平板以混合。在室温下避光孵育 30 分钟。

5. 向所有孔中加入 100 uL 检测缓冲液以中和荧光底物，并在 λex/em = 485/530 nm 处读取荧光或荧光偏振。

所需材料（但未提供）：

- 10 mM HCl 溶液，纯胃蛋白酶（例如 MP Biomedicals，货号 102598），以及如果需要的话，胃蛋白酶抑制剂对照品（例如 Pepstatin A，Cayman Chemical，货号 9000469）。移液装置及配件（例如多通道移液器）、黑色平底 96 孔板（例如 Corning Costar）、离心管和能够读取 λex/em = 485/530 nm 处荧光或荧光偏振的酶标仪。

实例：

胃蛋白酶抑制曲线。左图：胃蛋白酶与各种以产生荧光IC50曲线。右：A使用FP测量生成第二IC50曲线。

文献：

1. López-Otín, C., Bond, J. S. (2008). Proteases: multifunctional enzymes in life and disease. Journal of Biological Chemistry, 283(45): 30433–30437.

2. Marciniszyn, J., Jr, Hartsuck, J. A., & Tang, J. (1977). Pepstatin inhibition mechanism. Advances in experimental medicine and biology, 95, 199–210.

3. Sancho, J and Campos, L. (2003). The active site of pepsin is formed in the intermediate conformation dominant at mildly acidic pH. FEBS Letters, 538(1-3): 89-95. 

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。