BioAssay Systems 异柠檬酸脱氢酶测定试剂盒操作程序&样本准备方案

异柠檬酸脱氢酶（IDH）是一种催化异柠檬酸和α-酮戊二酸相互转化的酶。IDH存在三种亚型：IDH3使用辅酶NAD?，并催化三羧酸循环（TCA循环）的第三步；而IDH1和IDH2使用辅酶NADP?，并在TCA循环之外催化相同的反应。本试剂盒用于检测使用NADP?的IDH亚型的活性。IDH1和IDH2的突变与多种脑肿瘤和急性髓系白血病有关。BioAssay Systems的非放射性、比色法IDH检测试剂盒基于NADPH偶联的酶促反应，将四氮杂唑盐MTT还原为其还原形式，该还原形式在565纳米处具有最大吸收峰。在565纳米处的吸光度增加与酶活性成正比。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品异柠檬酸脱氢酶测定试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点：

- 快速且灵敏。线性检测范围（20微升样本）：30分钟反应时，0.1 - 100 U/L。

- 方便且高通量。均相“混合-孵育-测量”型检测。可轻松在高通量筛选（HTS）液体处理系统上自动化运行，每天可处理数千个样本。

应用领域：

- 生物样本（如血浆、血清、组织和培养基）中IDH活性的测定。

试剂盒组成（96孔板，100次检测）：

- 检测缓冲液：10毫升

- 二氢硫色素：120微升

- NADP/MTT溶液：1毫升

- 校准液：1.5毫升

- 底物：1毫升

储存条件：

试剂盒在室温下运输。收到后将所有组分储存于-20°C。保质期：收货后6个月。

注意事项：

试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规注意事项。请参阅材料安全数据表以获取详细信息。

操作程序：

本检测基于动力学反应。为确保孵育时间一致，向样本中加入工作试剂的速度应快，混合应简短但充分。建议使用多通道移液器。为了获得最佳的IDH活性，检测应在37°C下进行。检测也可以在室温下进行，但IDH的活性会显著降低，可能需要>1小时的反应时间才能获得足够的灵敏度。

样本准备：

- 血清和血浆：可以直接用于检测。

- 组织：解剖前，用磷酸盐缓冲液（pH 7.4）冲洗组织以去除血液。将组织（50毫克）在含有50 mM磷酸钾（pH 7.5）的缓冲液中均质化。在4°C下以10,000 x g离心15分钟。取出上清液用于检测。

- 细胞裂解液：通过在4°C下以2,000 x g离心5分钟收集细胞。对于贴壁细胞，不要使用蛋白酶酶收获细胞，而是使用橡胶刮刀。在含有50 mM磷酸钾（pH 7.5）的冷缓冲液中适当体积内均质化或超声处理细胞。在4°C下以10,000 x g离心15分钟。取出上清液用于检测。

- 样本保存：所有样本可以在-20°C至-80°C下保存至少一个月。

- 试剂准备：将解冻后的二氢硫色素置于冰上，将其他所有试剂平衡至37°C。使用前短暂离心试管。

- 工作试剂（WR）的配制：通过混合以下成分制备足够所有检测孔的工作试剂：对于每个孔，9微升底物、9微升NADP/MTT溶液、1微升二氢硫色素和70微升检测缓冲液。建议新鲜配制工作试剂。

反应准备：

1. 将100微升水（ODH?O）和100微升校准液（ODCAL）溶液分别加入透明平底96孔板的孔中。

2. 将每个样本的20微升分别加入不同的孔中。向每个样本孔中加入80微升工作试剂。轻拍孔板以混合。

3. 在37°C下孵育。使用孔板读取器在10分钟（OD??）和30分钟（OD??）时分别读取565纳米处的吸光度。

示例：

96孔平板测定中印度洋地黄含量的线性

文献：

1. Zhao, X et. al. (2013) Enzymatic Characterization of a Type II Isocitrate Dehydrogenase from Pathogenic Leptospira interrogans serovar Lai Strain 56601. Appl Biochem Biotechnol. Epub ahead of print.

2. Chen, C et. al. (2013) Cancer-associated IDH2 mutants drive an acute myeloid leukemia that is susceptible to Brd4 inhibition. Genes Dev.27(18):1974-85.

3. Chaumeil, MM et. al. (2013) Non-invasive in vivo assessment of IDH1 mutational status in glioma. Nat Commun. 4:2429.

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。