BioAssay Systems 葡萄糖脱氢酶测定试剂盒- 生物样本中GDH活性的测定

葡萄糖脱氢酶（GDH）属于氧化还原酶家族，特别是那些作用于供体的CH-OH基团与其他受体的酶。GDH参与磷酸戊糖途径。BioAssay Systems的非放射性、比色法GDH检测基于在NADH偶联的酶促反应中四氮唑盐MTT的还原，生成的MTT还原形式在565 nm处有最大吸收峰。在565 nm处的吸光度增加与酶活性成正比。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品葡萄糖脱氢酶测定试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点：

- 快速且灵敏。线性检测范围（20 uL样本）：15分钟反应时间为0.5 - 200 U/L。

- 方便且高通量。均相“混合-孵育-测量”型检测。可在高通量筛选液体处理系统上轻松自动化，每天处理数千个样本。

应用：

- 生物样本（如血浆、血清、组织和培养基）中GDH活性的测定。

试剂盒组成（96孔板，100次检测）：

- 检测缓冲液：10 mL

- 二氢叶酸还原酶：120 uL

- NAD/MTT：1 mL

- 校准液：1.5 mL

- 底物：1 mL

储存条件：  

试剂盒在常温下运输。收到后将所有组分储存于-20°C。有效期：收到后6个月。

注意事项：  

试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规注意事项。请参考材料安全数据表以获取详细信息。

操作步骤：

该检测基于动力学反应。为确保孵育时间一致，加入工作试剂到样本中的操作应迅速，混合应简短但充分。建议使用多通道移液器。可在任何所需温度（例如25°C或37°C）下进行检测。

样本准备：

- 血清和血浆可以直接检测。

- 组织：在解剖前，用磷酸盐缓冲液（pH 7.4）冲洗组织以去除血液。将组织（50 mg）在含有50 mM磷酸钾（pH 7.5）的缓冲液中匀浆。在4°C下以10,000 × g离心15分钟。取上清液用于检测。

- 细胞裂解液：通过在4°C下以2,000 × g离心5分钟收集细胞。对于贴壁细胞，不要使用蛋白酶酶收获细胞，而是使用橡胶刮刀。在含有50 mM磷酸钾（pH 7.5）的冷缓冲液中适当体积内匀浆或超声细胞。在4°C下以10,000 × g离心15分钟。取上清液用于检测。

- 所有样本可以在-20至-80°C下储存至少一个月。

试剂准备：  

将试剂平衡至所需的反应温度（例如25°C或37°C）。使用前短暂离心试管。通过混合以下试剂为每个96孔检测准备足够的工作试剂（WR）：8 uL底物，8 uL NAD/MTT溶液，1 uL二氢叶酸还原酶和70 uL检测缓冲液。

反应准备：

1. 将100 uL H?O（ODH?O）和100 uL校准液（ODCAL）溶液分别加入透明平底96孔板的孔中。

2. 将每个样本的20 uL分别加入单独的孔中，然后向每个样本孔中加入80 uL工作试剂（WR）。轻拍板子以混合。

3. 在酶标仪上读取565 nm的吸光度（OD?），15分钟后再次读取（OD??）。

所需材料（但未提供）：  

移液装置及配件（例如多通道移液器）、透明平底96孔板（例如VWR货号82050-760）、离心管和酶标仪。

示例：

文献：

1. Bak, TG (1967) "Studies on glucose dehydrogenase of Aspergillus oryzae. II Purification and physical and chemical properties". Biochim. Biophys. Acta. 139: 277–93.

2. Brink, NG, et al. (1953) "Beef liver glucose dehydrogenase. 1.Purification and properties". Acta Chem. Scand. 7: 1081–1089.

3. Thompson RE, Carper WR (1970) "Glucose dehydrogenase from pig liver. I. Isolation and purification". Biochim. Biophys. Acta 198 (3):397–406.

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。