BioAssay Systems 碱性磷酸酶测定试剂盒-ALP生产过程中的特性分析和质量控制

碱性磷酸酶（ALP）在碱性环境中催化磷酸酯的水解，生成有机自由基和无机磷酸盐。 在哺乳动物中，这种酶主要存在于肝脏和骨骼中。血清中ALP水平显著升高，一种被称为高碱性磷酸酶血症的疾病，与恶性胆道梗阻、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、肝淋巴瘤和结节病有关。

简单、直接且易于自动化的血清中ALP活性检测程序在研究和药物发现领域越来越受欢迎。 BioAssay Systems的QuantiChrom?碱性磷酸酶检测试剂盒专为直接在生物样本中测定ALP活性而设计，无需预处理。改进的方法利用对硝基苯磷酸酯作为底物，该底物可被ALP水解生成黄色产物（最大吸收波长为405 nm）。反应速率与酶活性成正比。

对硝基苯磷酸酯 → 对硝基苯酚 + 磷酸

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品碱性磷酸酶测定试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点

- 高灵敏度和宽线性范围。 使用5 ?L血清或血浆样本。检测限为2 U/L，线性范围高达800 U/L。

- 均质且简单的操作程序。 简单的“混合即测”程序可在5分钟内可靠定量ALP活性。

- 稳健且适用于高通量筛选（HTS）。 所有试剂均与高通量液体处理仪器兼容。

应用

- 直接检测：血清、血浆及其他来源中的ALP活性。

- ALP生产过程中的特性分析和质量控制。

- 药物发现：高通量筛选ALP抑制剂以及评估ALP抑制剂的效果。

试剂盒组成（96孔板，250次检测）

- 检测缓冲液：50 mL，pH 10.5

- 醋酸镁：1.5 mL，0.2 M

- pNPP液体：600 ?L，1 M

- 校准液：10 mL

- 酒石酸

储存条件

- 试剂盒在室温下运输。将pNPP液体存于-20°C，其他组分存于4°C。

- 保质期：收到后12个月。

注意事项

- 试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规预防措施。请参阅材料安全数据表以获取详细信息。

操作程序

- 本检测基于动力学反应。建议使用多通道移液器。向样本中加入工作试剂应迅速，混合应简短但充分。检测可在室温或37°C下进行。

- 试剂准备：将试剂平衡至室温。工作溶液的配制：对于每次96孔检测，将200 ?L检测缓冲液、5 ?L醋酸镁（最终浓度5 mM）和2 ?L pNPP液体底物（10 mM）混合。建议每次检测前新鲜配制，尽管工作溶液在室温下至少稳定一天。

- 样本准备：ALP在4°C下可稳定保存48小时，在-20°C下可稳定保存2个月。EDTA、草酸盐、氟化物和柠檬酸盐是已知的ALP抑制剂，应在样本准备过程中避免使用。血清、血浆（不含EDTA/柠檬酸盐，最好是未溶血的）和细胞培养基可以直接检测。要检测细胞内的ALP，可以按照以下方法制备细胞裂解液：用PBS洗涤10?个细胞，并在室温下用0.5 mL蒸馏水中的0.2% Triton X-100震荡20分钟进行裂解。

实例

使用96孔板方案。人的ALP活性（U/L）为13.4±0.4大鼠血清为190.4±1.6，山羊血清为202.8±4.3。

96孔平板测定ALP反应动力学随着ALP浓度的增加

文献参考：

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3. Harper, E., et al. (2020). RANKL treatment of vascular endothelial cells leading to paracrine pro-calcific signaling involves ROS production.Molecular and Cellular Biochemistry. 464(1-2): 111-117. 

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。