总蛋白浓度可以通过多种方法测定。
然而,蛋白质染料结合法具有简单、可靠、快速、易于自动化等优点,并且在评估肾功能和血脑屏障功能方面越来越受欢迎。BioAssay Systems的总蛋白测定试剂盒基于改进的焦棓酚红-钼酸盐蛋白质染料结合法。在600纳米处的颜色强度与样品中总蛋白浓度成正比。这种单一试剂可用于定量测定尿液(蛋白尿)和脑脊液(血脑屏障)中的总蛋白。
作为BioAssay Systems在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品总蛋白测定试剂盒。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
产品名称 | 货号 | 详情 |
总蛋白测定试剂盒 | BAS-QTPR-100 | 查看 |
主要特点
- 快速灵敏。测定仅需10分钟。线性检测范围为5-200毫克/分升蛋白。对于尿液样品,检测范围为1-20毫克/分升蛋白。
- 稳健可靠。尿液中的物质干扰极小(<2%)。
- 方便高效。均质“混合-孵育-测量”类型测定法。可在高通量筛选液体处理系统上轻松自动化,每天可处理数千个样品。
应用
用于生物样品(例如尿液、脑脊液)中总蛋白的测定。
96孔板读取器测定程序
在测定前,将所有试剂恢复至室温。
1. 标准品和样品。分别将5微升去离子水、5微升提供的蛋白标准品和5微升样品加入到透明平底96孔板的不同孔中。
2. 测定。向所有测定孔中加入200微升试剂。轻拍孔板以混合均匀。孵育10分钟。在孔板读取器上测量600纳米处的吸光度。
尿液样品
尿液样品通常蛋白质浓度很低,需要较大的样品体积和内标。应使用以下程序:
1. 在离心管中,将100毫克/分升的标准品用去离子水稀释至40毫克/分升(40微升100毫克/分升标准品+60微升去离子水)。
2. 样品需双份运行。如果存在颗粒物,需离心样品并使用清亮的上清液进行测定。将每个样品的20微升分别转移到四个不同的孔中:两个样品孔和两个内标孔。向样品孔中加入5微升去离子水,向内标孔中加入5微升40毫克/分升的标准品。将25微升去离子水转移到两个孔中。这将作为双份的空白对照。
注意:每个样品不需要单独的空白对照,同一块孔板上的所有样品可以使用相同的空白值。
3. 向每个蛋白测定孔中加入200微升试剂。
4. 在室温下孵育10分钟,然后在600纳米处读取吸光度。
注意:如果某个样品的OD标准品 - OD样品值低于0.05,则用等体积的水稀释样品并重复测定。将结果乘以稀释因子2。低内标信号是由于尿液中的其他分子干扰所致,稀释可以减少干扰,从而正确测量蛋白水平。
比色皿测定程序
1. 标准品和样品。分别将20微升去离子水、20微升提供的蛋白标准品和20微升样品加入到不同的比色皿中。
2. 测定。向每个比色皿中加入1毫升试剂。混合并孵育10分钟。在分光光度计上测量600纳米处的吸光度。
3. 在室温下孵育10分钟,然后在600纳米处读取吸光度。
需要但未提供的材料
对于96孔板测定:移液装置、透明平底96孔板和孔板读取器。对于比色皿测定:移液装置、比色皿和能够读取600纳米吸光度的分光光度计。
示例:
左:在96孔板读数器(Spectramax M2)上进行的标准曲线;
右:使用比色皿程序的标准曲线。
文献参考:
1. Joern WA, Schmoele L (1981). Urinary protein measurement by the Coomassie blue dye-binding method adapted to the ABA-l00 bichromatic analyzer. Clin Chem27:1305.
2. Sano K, et al (1981). Automatic assay of urinary protein using CoomassieBrilliant Blue G-250. Anal Biochem 113:197-201.
3. Watanabe N, et al (1984). Automatic method for determination of protein in urine with a Hitachi 726 analyzer: a modification of Bradford’s method.Anal Chem Specimen 7:27-31
BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司,专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒,产品种类齐全,主要用于科学研究和生物医药开发,以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验,已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括:1.血液尿液化学;2.酶活性测定;3.能量代谢;4.氧化应激;5.高通量HTS试剂;6.阴阳离子检测。
作为BioAssay Systems在中国区域的代理,艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。
微信扫码在线客服