尿酸酶(Uricase)或黄嘌呤氧化酶(Urate Oxidase,E.C. 1.7.3.3)
尿酸酶启动了尿酸的氧化过程,最终生成尿囊素。尿酸酶的活性存在于植物、动物和细菌中,但在类人猿中并不存在。因此,当尿酸水平过高时,人类就会患上痛风。BioAssay Systems的方法提供了一种简单且高通量的测定尿酸酶活性的实验方法。在此实验中,尿酸通过酶促反应转化为尿囊素,同时释放出过氧化氢(H2O2)。生成的过氧化氢与特定的染料发生反应,形成粉红色产物。在530/585纳米处荧光强度的变化与样本中的尿酸酶活性成正比。
作为BioAssay Systems在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品EnzyFluo 尿素酶测定试剂盒。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
产品名称 | 货号 | 详情 |
EnzyFluo 尿素酶测定试剂盒 | BAS-EURIC-100 | 查看 |
主要特点
灵敏度高。使用10微升样本。线性检测范围:荧光法测定尿酸酶活性为0.3 - 100 U/L。
快速。运行时间为10分钟,可快速得出结果。
方便。常温“混合即读”程序可轻松自动化,每天可高通量测定数千个样本。
应用
测定:用于测定生物样本(如细胞培养、非人类生物液体、细胞提取物和植物组织提取物)中的尿酸酶活性。
试剂盒组成
测定缓冲液:5毫升
染料试剂:120微升
底物:5毫升 1 mM尿酸
HRP酶:120微升
尿酸酶对照:20微升
标准品:100微升 3% H?O?
储存条件
试剂盒在冰上运输。将所有组分储存于-20°C。保质期为收到后六个月。
注意事项
试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规预防措施。请参阅材料安全数据表以获取详细信息。
荧光法测定
液体样本(如血清和血浆)可直接进行测定。组织和细胞裂解液需要澄清且无杂质。
注意:含巯基(-SH)的试剂(例如β-巯基乙醇、二硫苏糖醇,> 5微摩尔)、叠氮化钠、EDTA和十二烷基硫酸钠已知会干扰此实验,应在样本准备中避免使用。
将所有组分平衡至室温。打开前短暂离心试管。在实验过程中将解冻的试管置于冰上。
H?O?标准曲线。将10微升3% H?O?与870微升去离子水混合(最终浓度为10 mM),然后将10微升10 mM H?O?与990微升去离子水混合,得到100微摩尔H?O?。
荧光反应。通过混合以下试剂为每个孔准备足够量的工作试剂:50微升测定缓冲液、50微升1 mM尿酸底物、1微升HRP酶和1微升染料试剂。向每个孔中加入90微升工作试剂。
在动力学模式下,以激发波长530纳米和发射波长585纳米读取10分钟的荧光强度。
图表说明
左图:96孔荧光法测定。100 U/L尿酸酶、60 U/L尿酸酶、大鼠肝微粒体、豌豆根。
右图:大鼠肝脏细胞质(#1)、大鼠肝脏S9组分(#2)、大鼠肝微粒体(#3)、豌豆根(#4)和豌豆茎(#5)中尿酸酶的比活性。
文献参考:
1. Kratzer JT et al (2014) Evolutionary history and metabolic insights of ancient mammalian uricases. Proc Natl Acad Sci USA 111(10):3763-8.
2. Maiuolo J et al (2016) Regulation of uric acid metabolism and excretion. Int J Cardiol. 213:8-14
3. Roman YM (2023) The role of uric acid in human health: Insights from the Uricase gene. J Pers Med. 13(9):1409
BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司,专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒,产品种类齐全,主要用于科学研究和生物医药开发,以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验,已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括:1.血液尿液化学;2.酶活性测定;3.能量代谢;4.氧化应激;5.高通量HTS试剂;6.阴阳离子检测。
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