BioAssay Systems EnzyFluo 法尼基转移酶抑制剂筛选试剂盒，安全：非放射性检测

法尼基转移酶（FTase，EC2.5.1.58）催化法尼基焦磷酸（FPP）上的法尼基基团转移到靶蛋白C末端的半胱氨酸残基上。如果未得到适当调控，法尼基化蛋白（包括Ras超家族的小GTP酶）可能导致发育障碍和癌症。简单、直接且高通量的抑制剂筛选检测方法在肿瘤学研究中具有广泛的应用。BioAssaySystems的EIFT-400检测试剂盒提供了一种便捷的荧光法，用于筛选潜在的FTase抑制剂。在此检测中，FTase与法尼基焦磷酸和丹磺酰肽底物发生反应，可在λem/ex=340/550nm处测量荧光。通过荧光的减少来确定抑制作用。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品EnzyFluo 法尼基转移酶抑制剂筛选试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点

安全：非放射性检测。

均质且便捷：“混合-孵育-测量”型检测，无需洗涤和试剂转移步骤。

高通量：在384孔板格式中，通常观察到的Z’因子为0.8及以上。可自动化操作，每天可检测数千个样本。

应用

-用于FTase抑制剂的高通量筛选和药物调节剂的评估。

操作步骤

检测原理：本检测基于酶促动力学反应。为确保孵育时间一致，加入工作试剂时应迅速，混合应简短但充分。建议使用多通道移液器。注意：试剂盒中不包含FTase酶。

试剂准备：使用黑色、平底384孔板。在检测前，将所有组分平衡至室温，并在打开前短暂离心试管。每次检测运行应新鲜配制工作试剂（WR）。

酶准备：酶应在缓冲液中配制并新鲜使用。以下协议针对重组大鼠FTase酶（JenaBioscience，产品编号PR-102）进行了优化。如果使用不同的酶，建议您实验确定每孔使用的最佳酶量。

测试化合物准备：将测试化合物溶解在合适的溶剂中，例如DMSO。建议首先测试酶对所选溶剂的耐受性。在下面的例子中，大鼠FTase（JenaBioscience，产品编号PR-102）被发现可耐受高达2%（体积比）的DMSO。试剂盒中包含洛纳法尼布作为IC50对照。

1.酶和对照：将37.2?g/mL的FTase（最终浓度为7.4?g/mL）分别转移5?L到黑色384孔板的不同孔中。至少保留一个孔作为无抑制剂（对照）孔和一个无酶（空白）孔。分别向对照孔和空白孔中加入5?L的37.2?g/mLFTase和5?L的检测缓冲液。建议至少进行双份反应。

2.加入测试化合物：向酶孔中加入5?L测试化合物。向对照孔和空白孔中加入测试化合物溶解的溶剂。例如，如果测试化合物溶解在1%DMSO中，则向这些孔中加入5?L的1%DMSO。立即混合，并在室温下孵育10分钟，使测试化合物与FTase相互作用。

3.工作试剂准备：通过混合以下成分，为所有孔准备足够量的工作试剂（WR）：每孔0.5?L底物、20?L检测缓冲液和1?LTCEP。将15?LWR转移到所有孔中。立即轻拍平板以混合，并在室温下孵育。

4.读取荧光强度：在60分钟时，在λex/em=340/550nm处读取荧光强度。

实验示例

-重组大鼠FTase与不同浓度的洛纳法尼布共同孵育。每种抑制剂浓度中均含有1%（体积比）的DMSO。在7.4?g/mL的FTase酶存在下，洛纳法尼布的IC50值被确定为25.6nM。

文献参考：

[1]. Appels, Natalie et al (2005). Development of farnesyl transferase inhibitors: a review. Oncologist: vol. 10(8) 565-78.

[2]. Long, Stephen et al (2001). The crystal structure of human protein farnesyltransferase reveals the basis for inhibition by CaaX tetrapeptides and their mimetics: PNAS: vol. 98(23) 12948-12953.

[3]. Wang, Jingyuan et al (2017). New tricks for human farnesyltransferase inhibitor: cancer and beyond. MedChemComm: vol.

8(5) 841-854.

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。