法尼基转移酶(FTase,EC 2.5.1.58)催化法尼基焦磷酸盐将法尼基团转移到靶蛋白C末端的半胱氨酸残基上。如果调节不当,法尼基化蛋白(包括Ras超家族的小GTP酶)可能导致发育障碍和癌症。简单、直接且高通量的活性检测方法在癌症研究中应用广泛,而BioAssay Systems的EFTS-400检测试剂盒提供了一种方便的荧光法用于检测FTase活性。在此检测中,FTase与法尼基焦磷酸盐和丹磺酰肽底物反应,释放出可通过荧光(激发波长/发射波长=340/550 nm)检测的产物。
作为BioAssay Systems在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品【干冰】EnzyFluo 法尼基转移酶活性测定试剂盒。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
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【干冰】EnzyFluo 法尼基转移酶活性测定试剂盒 | BAS-EFTS-400 | 查看 |
主要特点
安全便捷。非放射性检测。“混合-孵育-测量”型检测。无需洗涤和试剂转移步骤。
灵敏准确。在384孔板检测中,FTase的线性检测范围为0.024–3.2 U/L。
高通量。可轻松自动化,每天检测数千个样本。
应用
用于定量测定生物样本中的FTase酶活性。
操作步骤
本检测基于酶催化的动力学反应。为确保孵育时间一致,加入工作试剂应迅速,混合应简短但充分。推荐使用多通道移液器。注意:试剂盒中不包含FTase酶。
试剂准备:使用黑色平底384孔板。检测前,将所有组分平衡至室温,并在打开前短暂离心试管。每次检测应新鲜配制工作试剂。
酶准备:酶应在缓冲液中配制并新鲜使用。建议通过实验确定每孔使用的最佳酶量。
384孔板FTase活性检测
1. 将5 uL样本分别转移至不同的孔中。
2. 通过混合每孔0.5 uL底物、30 uL检测缓冲液和1 uL TCEP,为所有样本孔配制足够的工作试剂(WR)。向所有样本孔中加入25 uL WR。立即轻拍孔板以混合。
3. 在时间零点和60分钟时读取荧光强度(激发波长/发射波长=340/550 nm),或连续60分钟动态读取荧光。
文献参考:
[1]. Hougland, James et al (2010). Identification of novel peptide substrates for protein farnesyltransferase reveals two substrate classes with distinct sequence selectivities. Journal of Molecular Biology: 395(1),176-190.
[2] Long, Stephen et al (2001). The crystal structure of human protein farnesyltransferase reveals the basis for inhibition by CaaX tetrapeptides and their mimetics: PNAS: vol. 98(23) 12948-12953.
[3]. Rowinsky, EK et al (1999). Ras protein farnesyltransferase: A strategic target for anticancer therapeutic development. J Clin Oncol:17(11), 3631-52.
BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司,专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒,产品种类齐全,主要用于科学研究和生物医药开发,以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验,已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括:1.血液尿液化学;2.酶活性测定;3.能量代谢;4.氧化应激;5.高通量HTS试剂;6.阴阳离子检测。
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