丝裂原活化蛋白激酶(MAPK/ERK)通路在细胞增殖、分化和迁移中起着关键作用。丝裂原的刺激最终会导致ERK1(T202/Y204)和ERK2(T185/Y187)的磷酸化。MAPK/ERK级联反应为癌症治疗药物的开发提供了许多有趣的靶点。
BioAssaySystems的基于细胞的ELISA检测方法可以直接在完整细胞中测量双重磷酸化的ERK1/2,并将信号与细胞总蛋白含量进行标准化。这种简单高效的检测方法省去了细胞裂解液制备的步骤,可用于研究激酶信号传导以及激酶抑制剂对细胞的影响。在此检测中,细胞在96孔板中培养,并用配体或药物处理。随后,细胞在孔中固定并透化。通过荧光ELISA检测ERK1/2的磷酸化(pERK),然后测量每个孔中的总蛋白含量。
作为BioAssay Systems在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品【干冰】EnzyFluo ERK磷酸化测定试剂盒。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
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【干冰】EnzyFluo ERK磷酸化测定试剂盒 | BAS-EERK-100 | 查看 |
主要特点
-全新升级。检测总时间从标准的21小时缩短至6.5小时(实际操作时间为2.5小时)。
-简单便捷。细胞直接在96孔板中培养,无需细胞裂解。
-准确且高通量。在同一孔中将蛋白磷酸化水平与细胞总蛋白进行标准化,极大地减少了孔间差异。可轻松自动化为高通量96孔板检测,每天可处理数千个样本。
应用
-用于培养细胞中ERK1/2磷酸化状态的定量荧光免疫酶联检测。
-评估配体或药物对ERK磷酸化的影响。
-已测试物种:人、小鼠、大鼠。
试剂盒组成
-洗涤缓冲液原液:25mL
-封闭缓冲液:25mL
-蛋白染色液:6mL
-染料试剂:120uL
-Ab1抗体:10uL
-Ab2(gM-HRP)抗体:10uL
储存条件:将所有试剂储存于-20°C。有效期为自收货之日起6个月。
注意事项:试剂仅供研究使用。使用试剂时需遵循实验室试剂的常规注意事项。请参阅材料安全数据表以获取详细信息。
实验结果示例
-左图:PANC-1细胞经佛波醇酯(PMA)处理后ERK1/2磷酸化的动力学曲线。
-右图:激酶抑制剂索拉非尼对ERK1/2磷酸化的抑制作用。细胞先用药物处理3小时,然后用PMA处理5分钟。RBL-2H3、NIH3T3和PANC-1细胞系的IC??值分别为2.1uM、11.4uM和11.5uM。
文献参考:
1. Cobb MH, et al (1994). The mitogen-activated protein kinases, ERK1 and ERK2. Semin Cancer Biol. 5(4):261-268.
2. Daniluk J, Dabrowski A. (2007). The effect of concomitant stimulation with cholecystokinin and epidermal growth factor on extracellular signalregulated kinase (ERK) activity in pancreatic acinar cells. J Physiol Pharmacol. 58(3):441-53.
3. Iqbal J, et al (2007). Rapid in vivo effects of estradiol-17beta in ovine pituitary gonadotropes are displayed by phosphorylation of extracellularly regulated kinase, serine/threonine kinase, and 3',5'-cyclic adenosine 5'-monophosphate-responsive element-binding protein. Endocrinology 148 (12): 5794-802.
BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司,专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒,产品种类齐全,主要用于科学研究和生物医药开发,以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验,已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括:1.血液尿液化学;2.酶活性测定;3.能量代谢;4.氧化应激;5.高通量HTS试剂;6.阴阳离子检测。
作为BioAssay Systems在中国区域的代理,艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。
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