BioAssay Systems【干冰】EnzyFluo AMPK磷酸化检测试剂盒-高效检测细胞代谢调控

5-AMP激活的蛋白激酶（AMPK）是细胞内能量平衡的关键感应器。AMPK在AMP/ATP比值升高时被激活，这种比值升高可能由多种因素引起，例如肌肉收缩、饥饿或缺氧。AMPK是一种由α-（63kDa）、β-（38kDa）和γ-（38kDa）亚基组成的异源三聚体蛋白复合物。每个亚基都已鉴定出同工型（α1、α2、β1、β2、γ1、γ2、γ3），理论上可以形成12种不同的蛋白。α-亚基包含一个丝氨酸/苏氨酸激酶结构域，调节亚基包含AMP和ATP（γ-亚基）以及糖原（β-亚基）的结合位点。

AMPK通过催化结构域内Thr-172位点的磷酸化被激活。AMP结合会使AMPK活性比基础水平增加2至5倍。AMP与γ-亚基结合会导致激酶的变构激活，并在激酶结构域中诱导构象变化，保护AMPK免受Thr-172的去磷酸化。BioAssaySystems的基于细胞的ELISA检测可测量完整细胞中的磷酸化AMPK，并将信号与总蛋白含量进行标准化。该抗体能够识别两种α-亚基，因此可用于来自所有组织（人类、小鼠、大鼠）的细胞。这种简单高效的检测方法免去了细胞裂解液的制备，并可用于短期和长期检测中AMPK调控的研究。在此检测中，生长在96孔板中的细胞在孔内被固定并通透化。使用荧光ELISA测量AMPK磷酸化（pAMPK），随后测量每个孔中的总蛋白。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品【干冰】EnzyFluo AMPK磷酸化检测试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点

-灵敏：可在每孔少至500个细胞中测量pAMPK的调节。

-改进升级：将标准的21小时总检测时间缩短至6.5小时（实际操作时间为2.5小时）。

-简单便捷：细胞直接在96孔板中培养，无需细胞裂解。

-准确且高通量：将蛋白质磷酸化水平与同一孔中的总细胞蛋白进行标准化，极大地减少了孔间差异。可轻松自动化为高通量96孔板检测，每天可处理数千个样本。

应用

-定量荧光免疫酶检测：用于培养细胞中AMPK磷酸化状态的检测。

-评估直接和间接调节AMPK磷酸化：已测试物种包括人类、小鼠和大鼠。

试剂盒组成

-洗涤缓冲液：25mL

-封闭缓冲液：25mL

-蛋白染色液：6mL

-染料试剂：120?L

-Ab1：10?L

-Ab2（gR-HRP）：10?L

储存条件

试剂盒在运输过程中使用冰袋。收到后，请将所有试剂储存于-20°C。保质期为收到后6个月。

注意事项

试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规预防措施。请参阅材料安全数据表以获取详细信息。

左侧：二甲双胍诱导 PANC-1 细胞中 AMPK 磷酸化的时间过程。

右侧：PANC-1 细胞在二甲双胍处理 3 小时后的 AMPK 磷酸化剂量反应曲线。未处理的 PANC-1 细胞中的基础 AMPK 磷酸化水平定义为 100%。

文献参考：

1. Tsuda, Yuichi, et al (2017). Trypsin-Treated beta-Lactoglobulin Improves Glucose Tolerance in C57BL/6 Mice by Enhancing AMPK Activation and Glucose Uptake in Hepatocytes.. Biological and Pharmaceutical Bulletin 40.11: 1917-1922.

2. Chen, Hu, et al (2019). 6PGD inhibition sensitizes hepatocellular carcinoma to chemotherapy via AMPK activation and metabolic reprogramming. Biomedicine & Pharmacotherapy 111: 1353-1358.

3. Cao, J. et al (2020). 6PGD Upregulation is Associated with Chemo-and Immuno-Resistance of Renal Cell Carcinoma via AMPK SignalingDependent NADPH-Mediated Metabolic Reprograming. The American journal of the medical sciences, 360(3), 279-286. 

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。