BioAssay Systems【干冰】EnzyChrom 乙酰胆碱检测试剂盒样本处理&检测步骤

乙酰胆碱是一种在胆碱能神经元中产生的神经递质。 它在骨骼肌运动、平滑肌和心肌的调节以及学习、记忆和情绪中发挥重要作用。BioAssay Systems的方法提供了一种简单、直接且高通量的检测方法，用于测量生物样本中的乙酰胆碱。在该检测中，乙酰胆碱被乙酰胆碱酯酶水解为胆碱，胆碱随后被胆碱氧化酶氧化为甜菜碱和H?O?。生成的H?O?与特定染料反应，形成粉红色产物。在570 nm处的吸光度或在530/585 nm处的荧光强度与样本中的乙酰胆碱浓度成正比。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品【干冰】EnzyChrom 乙酰胆碱检测试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点：

使用20 uL样本。线性检测范围：比色法检测为10到200 uM，荧光法检测为0.4到10 uM乙酰胆碱。

应用：

检测：血清、血浆、尿液、唾液、乳汁、组织和细胞培养等生物样本中的乙酰胆碱。

药物发现/药理学：评估药物对乙酰胆碱代谢的影响。

试剂盒组成：

检测缓冲液：10 mL

乙酰胆碱酯酶：120 uL

酶混合液：干燥

染料试剂：120 uL

标准品：400 uL（2 mM乙酰胆碱）

储存条件：试剂盒在冰上运输。将所有组分储存于-20°C。保质期：收货后6个月。

注意事项：试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规注意事项。请参阅材料安全数据表以获取详细信息。

样本处理：

液体样本（如血清和血浆）可以直接检测。组织和细胞裂解液可以通过在冰冷的1×PBS中匀浆并离心（14,000 rpm，5分钟）来制备。使用清亮的上清液进行检测。乳汁样本需要通过将600 uL乳汁与100 uL 6 N HCl混合来澄清。以14,000 rpm离心5分钟。将300 uL上清液转移到干净的试管中，并用50 uL 6 N NaOH中和。中和后的上清液可用于检测（稀释因子n = 1.36）。

注意：(1) 含有巯基（-SH）的试剂（如β-巯基乙醇、二硫苏糖醇，>5 uM）会干扰此检测，应在样本准备中避免使用。  

  (2) 该检测基于酶催化的动力学反应。加入工作试剂应迅速，混合应简短但要充分。

检测步骤：

1. 平衡试剂。将所有组分恢复至室温。打开前短暂离心试管。检测过程中将解冻的试管置于冰上。用120 uL检测缓冲液复溶酶混合液。复溶后的酶混合液在-20°C储存时稳定1个月。注意：复溶后的酶混合液解冻后可能会出现黄色沉淀。如果出现沉淀，通过以14,000 rpm离心2分钟将其沉淀，并使用清亮的上清液。

2. 标准品制备。将24 uL 2 mM标准品与216 uL去离子水混合（最终浓度为200 uM）。

将20 uL稀释后的标准品分别加入透明平底96孔板的各个孔中。

样本：将每个样本的20 uL分别加入孔中。注意：如果已知样本中含有胆碱，需额外准备一个样本空白孔，加入20 uL样本。

3. 显色反应。按每孔混合85 uL检测缓冲液、1 uL乙酰胆碱酯酶、1 uL酶混合液和1 uL染料试剂来准备足够量的工作试剂。向每个孔中加入80 uL工作试剂。注意：对于含有胆碱的样本，准备不含乙酰胆碱酯酶的空白对照试剂（即85 uL检测缓冲液、1 uL酶混合液和1 uL染料试剂）。向每个样本空白孔中加入80 uL对照试剂。

立即轻拍平板以混合。在室温下孵育30分钟。

4. 读取吸光度。在570 nm（550-585 nm）处读取吸光度。

文献参考：

1. He C, et al (2012). Embryonic exposure to benzo(a)pyrene influences neural development and function in rockfish (Sebastiscus marmoratus). Neurotoxicology 33(4):758-62.

2. Chen L et al (2012). Acute exposure to DE-71: Effects on locomotor behavior and developmental neurotoxicity in zebrafish larvae.Environ Toxicol Chem. 31(10):2338-44.

3. Baitharu, I., et al (2013). Withania somnifera root extract ameliorates hypobaric hypoxia induced memory impairment in rats. Journal of ethnopharmacology 145(2): 431-441.

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。