唾液酸是九碳糖酸及其N-或O-取代衍生物的总称。其中最常见的成员是N-乙酰神经氨酸(NANA)。唾液酸广泛分布于哺乳动物的组织和体液中,包括血清。研究表明,唾液酸化的寡糖具有抗病毒特性,并且会影响血液凝固和胆固醇水平。体液中的唾液酸水平也是诊断癌症的重要标志物。简单直接的唾液酸浓度测定方法在研究和药物发现中具有广泛的应用。BioAssay Systems的唾液酸检测采用改进的Warren方法,唾液酸被氧化生成甲酰丙酮酸,后者与硫代巴比妥酸反应生成粉红色产物。在549 nm处的吸光强度或在λem/ex = 585/555 nm处的荧光强度与样本中的唾液酸浓度成正比。
作为BioAssay Systems在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品唾液酸测定试剂盒。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
产品名称 | 货号 | 详情 |
唾液酸测定试剂盒 | BAS-DSLA-100 | 查看 |
唾液酸测定试剂盒主要特点:
- 灵敏且准确。最少可使用60 ?L样本。96孔板检测的线性范围:比色法检测为5至1000 ?M唾液酸,荧光法检测为0.5至100 ?M。
应用范围:
- 直接检测:生物样本(如血清、血浆、唾液、乳汁)中的唾液酸。
试剂盒组成:
- 染料试剂:6 mL
- 氧化试剂:10 mL
- 10% TCA:5 mL
- 水解试剂:10 mL
- DMSO:12 mL
- 标准品:500 ?L,10 mM唾液酸
储存条件:试剂盒在常温下运输。将标准品储存于-20°C,其余试剂储存于室温。自收货之日起有效期为六个月。
注意事项:试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规预防措施。详细信息请参阅材料安全数据表。
比色法操作步骤:
1. 标准品准备。将所有组分平衡至室温。将25 ?L 10 mM标准品与225 ?L去离子水混合,制备1000 ?M唾液酸标准预混液。
2. 样本处理。为了测定总唾液酸(TSA),样本需要经过水解以释放结合的唾液酸。在离心管中,将20 ?L样本、40 ?L去离子水和40 ?L水解试剂混合。在80°C下加热60分钟,冷却后短暂离心。加入25 ?L 10% TCA,涡旋混合后以14,000 rpm离心10分钟。将25 ?L上清液转移至干净的试管中,并标记为“TSA”。
为了测定游离唾液酸(FSA),直接通过混合40 ?L样本和10 ?L 10% TCA沉淀蛋白。涡旋混合后以14,000 rpm离心10分钟。将25 ?L上清液转移至干净的试管中,并标记为“FSA”。
3. 氧化反应。为每个试管准备工作试剂,将15 ?L水解试剂、50 ?L去离子水和65 ?L氧化试剂混合。向每个试管中加入125 ?L工作试剂,室温下静置60分钟。
4. 显色反应。向每个试管中加入50 ?L染料试剂,混合后在100°C下加热10分钟。冷却5-10分钟后,向每个试管中加入100 ?L DMSO。混合后以14,000 rpm离心5分钟。将250 ?L上清液转移至透明平底96孔板的各个孔中。
5. 在549 nm(540-555 nm)处读取吸光度。
荧光法操作步骤:
荧光法检测比比色法灵敏10倍。在去离子水中准备0、30、60和100 ?M唾液酸的标准品。样本处理、氧化和显色步骤与比色法相同,但最终反应混合物需转移至黑色平底96孔板的孔中。在λex = 555 nm和λem = 585 nm处读取荧光强度。
所需材料(但未提供):
- 移液装置、离心管、离心机、加热块、透明平底96孔板、黑色96孔板(例如Corning Costar)和酶标仪。
文献参考:
1. Esievo, K. A. N. et al (2021). Elevated serum sialic acids, a potent biomarker of alloxan-induced type 1 diabetes in dogs by
ethanolic extract of Anogeissus leiocarpus. Journal of Diabetes &Metabolic Disorders, 1-8.
2. Taib, I.S. et al.(2015) "Palm oil tocotrienol-rich fraction attenuates testicular toxicity induced by fenitrothion via an oxidative stress mechanism." Toxicology Research 4.1: 132-142.
3. Carvalho FA, et al (2011). Variations on fibrinogen-erythrocyte interactions during cell aging. PLoS One. 6(3):e18167.
BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司,专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒,产品种类齐全,主要用于科学研究和生物医药开发,以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验,已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括:1.血液尿液化学;2.酶活性测定;3.能量代谢;4.氧化应激;5.高通量HTS试剂;6.阴阳离子检测。
作为BioAssay Systems在中国区域的代理,艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。
微信扫码在线客服