BioAssay Systems 脂肪酸摄取测定试剂盒- 测定完整细胞中长链脂肪酸的摄取

长链脂肪酸（LCFA）是动物的重要燃料来源，作为β-氧化的底物，并且是许多不同细胞结构的构建模块。长链未酯化脂肪酸（LCFA）通过膜转运蛋白进入细胞，细胞中LCFA水平的增加在糖尿病、肥胖相关疾病、心血管疾病以及某些类型的癌症中较为常见。因此，脂肪酸摄取是治疗代谢紊乱的重要治疗靶点，也是代谢研究的重要课题。

BioAssay Systems的荧光细胞基脂肪酸摄取检测试剂盒使用一种荧光脂肪酸类似物，该类似物被脂肪酸转运蛋白摄取并在细胞内积累。加入猝灭试剂以阻断培养基中的细胞外荧光信号。贴壁细胞摄取脂肪酸类似物后，底部读取的荧光光度计在λex/em = 488/523 nm处测量荧光信号的增加。这种高通量检测方法可用于评估细胞中的脂肪酸摄取活性，并筛选激活剂和抑制剂。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品脂肪酸摄取测定试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点：

- 安全。非放射性检测。

- 快速且灵敏。均相“加样即读”检测。无需洗涤、裂解或染色步骤。

- 简单便捷。可作为高通量检测方法，用于细胞中脂肪酸转运及其调节剂的筛选。

应用：

- 测定完整细胞中长链脂肪酸的摄取。

- 评估配体或药物对脂肪酸转运的影响。

试剂盒组成（96孔板，100次检测）：

- 检测缓冲液：12 mL

- 底物：120 uL

- 猝灭试剂：1 mL

储存条件：  

将所有试剂储存于-20°C。有效期为收到后12个月。

注意事项：  

试剂仅供研究使用。打开前短暂离心试管。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规注意事项。请参考安全数据表以获取详细信息。

检测步骤：

1. 为了避免交叉污染，在添加每种试剂或样本之间更换移液管尖。建议使用多通道移液器。

2. 建议样本以三份或更多进行检测。

3. 建议尽量降低实验处理中的DMSO浓度，以减少对细胞的损伤。尽量保持孔中的浓度在1%或以下。

A. 细胞培养、饥饿和处理

1. 在透明底部黑色96孔培养板中，每孔铺200 uL浓度为5-8×10?的3T3-L1细胞。在细胞培养箱中于37°C孵育4小时或过夜。如果当天进行检测，则建议使用促进细胞黏附的聚合物（如聚-D-赖氨酸）的培养板。  

   注意：每孔所需的细胞数量取决于细胞大小和脂肪酸的代谢需求。不同细胞系可能需要不同的细胞数量。

2. 移去200 uL旧培养基，并用90 uL无血清培养基饥饿细胞1小时，以增加其代谢需求。

3. 向饥饿培养基中加入10 uL实验处理物，并在所需温度下孵育所需时间（例如：37°C，30分钟）。  

   注意：务必包括一个对照组，加入10 uL与处理物相同溶剂（如10% DMSO）的溶液，以及一个仅含培养基而无细胞的空白孔。

B. 加入工作试剂

1. 工作试剂制备：在加入孔之前，提前10分钟制备工作试剂，并将其预热至37°C。对于每个反应孔，通过混合1 uL底物、8 uL猝灭试剂和100 uL检测缓冲液来制备工作试剂。

2. 在保留无血清培养基的情况下，向细胞中额外加入100 uL工作试剂。

3. 在37°C下，使用底部读取模式在λex/em = 488/523 nm处读取孔板60分钟的数据。使用60分钟时的数据（F60）。  

   注意：如果无法使用这些波长，激发波长可在470-495 nm之间变化，发射波长可在500-550 nm之间变化。在这种设置下，荧光强度可能会较低。建议尽可能运行动力学数据，并每隔1-5分钟测量一次。

抑制剂筛选示例协议

1. 铺板细胞，并在37°C下孵育至少4小时。移去细胞培养基，用90 uL无血清培养基饥饿1小时。

2. 按照最终浓度的10倍准备抑制剂浓度，并加入10 uL至孔中，使孔中的化合物浓度为1倍。作为对照，向对照孔中加入10 uL测试化合物所溶解的溶剂（如10% DMSO）。在37°C下孵育30分钟。

3. 使用多通道移液器加入工作试剂，并在37°C下在λex/em = 488/523 nm处读取孔板60分钟的数据。

4. 使用以下公式计算活性百分比。

可选：在筛选抑制剂后，可能需要进一步筛选细胞毒性，以排除那些看似抑制脂肪酸摄取但实际上杀死细胞的化合物。BioAssay Systems提供多种细胞活性检测产品，如C2LD-100、CQBL-05K或CQMT-500。

示例：

3T3-L1细胞脂肪酸摄取试验。3T3 L-1细胞在60000个细胞/孔，饥饿，并按照方案进行处理。左上：分化和未分化的3T3-L1活性存在160 nM胰岛素和30μM竞争对手2-溴棕榈酸酯。顶端右图：3T3-L1脂肪细胞从胰岛素中摄取脂肪酸的增加。底部左：2-溴棕榈酸酯的脂肪酸转运抑制曲线。抑制剂是与工作试剂一起添加，而不是在30分钟的预孵育过程中添加。右下：苦参素的脂肪酸转运抑制曲线。在运行之前，将抑制剂孵育30分钟。

文学：

1. Fong, J., Leu, S., & Chai, S. (1997). Differential inhibition of lipolysis by  2-bromopalmitic acid and 4-bromocrotonic acid in 3T3-L1 adipocytes.Lipids and Lipid Metabolism. 1344(1): 65-73.

2. Shintani, M., et al. (2000). Downregulation of leptin by free fatty acids in rat adipocytes: Effects of triacsin C, palmitate, and 2-bromopalmitate.

3. Szkudelski, T., Szkudelska, K. (2011). Short-term effects of palmitate and 2-bromopalmitate on the lipolytic activity of rat adipocytes. Life Sciences. 89(13-14): 450-455. 

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。