BioAssay Systems 胆固醇摄取测定试剂盒,基于细胞对荧光标记胆固醇探针的摄取

胆固醇是一种固醇类脂质，存在于细胞膜中，并在所有动物的血液中运输。它用于形成细胞膜和激素，并在细胞信号传导过程中发挥重要作用。细胞对胆固醇水平的调节是一个复杂的系统，其中的异常情况与肥胖和心脏病有关。胆固醇摄取的增加也与高度增殖的癌细胞有关。通过监测细胞对胆固醇的摄取，可以探索这些日益严重的健康问题，并筛选可能的药物治疗方法。

BioAssay Systems的胆固醇摄取检测试剂盒基于细胞对荧光标记胆固醇探针的摄取。在λex/em = 485/535 nm处测量的荧光强度与细胞摄取的胆固醇量成正比。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品胆固醇摄取测定试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点：

- 方便：直接在96孔荧光板中处理细胞。

- 安全：非放射性检测。

- 高通量：可作为高通量96孔板检测方法，每天可处理数千个样本。

应用：

- 直接检测：贴壁细胞的胆固醇摄取、胆固醇摄取抑制剂的筛选以及药物对胆固醇摄取的影响评估。

试剂盒组成（96孔板，100次检测）：

- 检测试剂：12 mL

- 荧光示踪剂：250 uL

- 阳性对照（2.5 mM）：20 uL

储存条件：

试剂盒在室温下运输。收到后将所有组分储存于-20°C。有效期：收到后6个月。

注意事项：

试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规注意事项。请参考材料安全数据表以获取详细信息。

试剂准备：

在检测前将所有组分平衡至室温。打开前短暂离心试管。

操作步骤：

示踪剂培养基的制备：

通过将荧光示踪剂稀释1:50于无血清培养基或低百分比胎牛血清（FBS）培养基（<1%）中制备示踪剂培养基。您将使用示踪剂培养基来制备处理组、对照组和阳性对照组的培养基。

使用96孔板的检测步骤：

1. 使用黑色、平底、荧光96孔板进行检测。  

- 对于对照孔，将细胞以期望的密度接种于100 uL示踪剂培养基中。  

- 对于阳性对照，在单独的试管中将2.5 mM阳性对照稀释1:1000于示踪剂培养基中，最终浓度为2.5 uM。将细胞以期望的密度接种于100 uL含有阳性对照的示踪剂培养基中。注意：您可能需要测试不同浓度的阳性对照，以确定对所用细胞系最有效的浓度。  

- 对于每个处理组，在单独的试管中将处理物或化合物以期望的浓度加入示踪剂培养基中。将细胞以期望的密度接种于100 uL含有处理物的示踪剂培养基中。  

- 注意：我们建议所有实验变量至少进行双份检测，如果不是三份或更多的话。

2. 让细胞生长24至72小时，或达到期望的融合度。

3. 小心吸去所有孔中的培养基。

4. 用100 uL 1×PBS冲洗所有孔两次。确保冲洗后完全去除PBS。

5. 在所有孔中加入100 uL检测试剂。

6. 立即在λex/em = 485/535 nm处读取荧光强度。

所需材料（但未提供）：

移液装置、培养基、PBS、黑色平底96孔板以及能够读取λex/em = 485/535 nm的荧光板读取器。

细胞密度与胆固醇摄取：

PANC1细胞在含有1% FBS的DMEM培养基中以不同细胞密度接种，并加入荧光示踪剂。在检测前培养48小时。

阳性对照：

MDA-MB-231细胞在无血清培养基中用不同浓度的阳性对照处理，并加入荧光示踪剂。在检测前培养72小时。

示例：

- 左图：细胞密度与胆固醇摄取：PANC1细胞在含有1%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基中以不同细胞密度接种，并加入荧光示踪剂。在检测前培养48小时。

- 右图：阳性对照：MDA-MB-231细胞在无血清培养基中用不同浓度的阳性对照处理，并加入荧光示踪剂。在检测前培养72小时。

文学：

1. Beloribi-Djefaflia, S., et al (2016). Lipid metabolic reprogramming in cancer cells. Oncogenesis 5, e189.

2. Martin, B., van Golen, K. (2012). A Comparison of Cholesterol Uptake and Storage in Inflammatory and Noninflammatory Breast Cancer Cells. Int J Breast Cancer 2012, Article ID 412581.

3. Feng, D., et al (2010). Curcumin inhibits cholesterol uptake in Caco-2 cells by down-regulation of NPC1L1. Lipids Health Dis 9: 40.

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。