BioAssay Systems 胰凝乳蛋白酶抑制剂试剂盒-评估药物和筛选潜在的胰凝乳蛋白酶抑制剂

胰凝乳蛋白酶（Chymotrypsin，EC 3.4.21.1）是一种消化性丝氨酸蛋白酶，它在许多真核生物和原核生物中水解膳食蛋白质。胰凝乳蛋白酶主要在芳香族氨基酸苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸的羧基侧切割肽链。BioAssay Systems的QuantiFluo?胰凝乳蛋白酶抑制剂检测试剂盒使用了一种荧光素异硫氰酸酯（FITC）标记的合成底物。荧光素标记的荧光被高度猝灭。当样本中的胰凝乳蛋白酶消化底物时，底物被切割成较小的肽段，从而消除了荧光猝灭。在λex/em = 485/530 nm处测量FITC标记片段的荧光或荧光偏振（FP）。通过荧光的减少来确定抑制作用。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品胰凝乳蛋白酶抑制剂试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

主要特点  

- 安全。非放射性检测。  

- 均相且便捷。均相“混合-孵育-测量”型检测法。无需洗涤和试剂转移步骤。  

- 稳定且高通量。可轻松自动化，每天可检测数千个样本。检测具有很高的稳定性，Z’因子>0.8。

应用  

- 用于评估药物和筛选潜在的胰凝乳蛋白酶抑制剂。

试剂盒内容（96孔板检测100次）  

- 检测缓冲液：10 mL  

- 底物：100 ?L  

储存条件  

试剂盒在室温下运输。收到后将所有组分储存于-20°C。保质期：收货后6个月。

注意事项  

试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规安全措施。请参考材料安全数据表以获取详细信息。

操作步骤  

- 在检测前，将所有组分平衡至室温。本检测基于动力学反应。为确保孵育时间一致，向样本中加入工作试剂时应迅速，混合应简短但充分。建议使用多通道移液器。检测可在室温下进行。注意：本试剂盒不包括酶或抑制剂。客户需自行提供所需的酶或抑制剂。

样本准备：  

- 为防止自消化，纯胰凝乳蛋白酶溶液可在酸性条件下（1 mM HCl，pH 3.0）长期储存于-80°C。可加入2 mM CaCl?以稳定储存液。将纯化的胰凝乳蛋白酶稀释于检测缓冲液中。胰凝乳蛋白酶应置于冰上，并尽快使用。在本实验中，每个孔中使用了10 U/mL的胰凝乳蛋白酶。将测试化合物溶解于适当的溶剂中（例如DMSO）。在使用之前，应先测试酶对溶剂的耐受性。对于猪胰凝乳蛋白酶，检测中DMSO的最终浓度应<2%。

96孔板抑制剂筛选：  

1. 将30 ?L胰凝乳蛋白酶分别加入黑色平底96孔板的不同孔中（反应中为10 U/mL胰凝乳蛋白酶）。同时，分别准备30 ?L胰凝乳蛋白酶（“对照”）和30 ?L检测缓冲液（“空白”）孔。  

2. 向对照和空白孔中加入10 ?L溶解测试化合物的缓冲液溶剂。例如，如果测试化合物溶解于含有0.1% DMSO的缓冲液中，则向这些孔中加入10 ?L该溶液。  

3. 向其余含有酶的孔中加入10 ?L测试化合物。轻拍平板混合，并在室温下孵育15分钟，以使抑制剂阻断酶活性。  

4. 通过将1 ?L底物和99 ?L检测缓冲液混合，为每个孔准备足够量的工作试剂。向所有孔中加入80 ?L工作试剂。轻拍平板混合。在室温下避光孵育30分钟。在λex/em = 485/530 nm处读取荧光或荧光偏振（FP）。

所需材料（但未提供）  

- 纯化的胰凝乳蛋白酶（例如MedChemExpress，货号HY108910）以及（如果需要）胰凝乳蛋白酶抑制剂对照（例如大豆胰蛋白酶抑制剂，Cayman Chemical，货号14502）。  

- 移液装置及配件（例如多通道移液器）、黑色平底96孔板（例如Corning Costar）、离心管，以及能够读取λex/em = 485/530 nm处荧光或荧光偏振的微孔板读数仪。

胰凝乳蛋白酶抑制曲线  ：

- 左图：胰凝乳蛋白酶与不同浓度的大豆胰蛋白酶抑制剂孵育，生成荧光IC??曲线。  

- 右图：为荧光偏振（FP）测量生成了第二个IC??曲线。

文学：

1. López-Otín, C., Bond, J. S. (2008). Proteases: multifunctional enzymes in life and disease. Journal of Biological Chemistry, 283(45): 30433–30437.

2. Shah, D., Mital, K. (2018). The Role of Trypsin: Chymotrypsin in Tissue Repair. Advances in Therapy, 35(1): 31–42.

3. Vreeke, G. J. C., et al. (2023). The path of proteolysis by bovine chymotrypsin. Food research international (Ottawa, Ont.), 165: 112485. 

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。