BioAssay Systems 【干冰】EnzyChrom ADP检测试剂盒，均质且方便

腺苷二磷酸（ADP）是ATP在ATP酶作用下脱磷酸的产物。 ADP可以通过ATP合酶重新转化为ATP。ADP水平可以调节参与中间代谢的几种酶。传统上，ADP水平是通过荧光素酶/荧光素介导的检测方法来测量的，这需要先将ADP转化为ATP。然而，由于这些检测方法需要在将ADP转化为ATP之前测量样本中的ATP，如果新生的ATP浓度显著高于ADP浓度，那么ATP信号就会淹没ADP信号。BioAssay Systems新设计的ADP检测试剂盒提供了一种方便的荧光法来测量ADP水平，即使在存在ATP的情况下也可以检测。在该检测中，ADP被转化为ATP和丙酮酸。生成的丙酮酸随后通过荧光法进行定量（激发波长/发射波长=530/590 nm）。该检测方法简单、灵敏、稳定、适用于高通量筛选，并且可以检测到低至0.1 uM的ADP。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品【干冰】EnzyChrom ADP检测试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

【干冰】EnzyChrom ADP检测试剂盒：

主要特点：

安全。非放射性检测。

灵敏且准确。可以定量低至0.1 uM的ADP。

均质且方便。“混合-孵育-测量”型检测。

无需洗涤和试剂转移步骤。

稳健且适用于高通量筛选（HTS）：可以轻松在HTS液体处理系统上自动化操作，每天处理数千个样本。

试剂盒组成：

试剂A：6 mL

酶：120 uL

10%三氯乙酸（TCA）：6 mL

试剂B：6 mL

标准品：100 uL

中和剂：1.5 mL

应用：细胞和其他生物样本中ADP的测定。

储存条件：将所有试剂储存于-20°C。本产品在冰上运输。保质期至少为6个月。

注意事项：试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规注意事项。请参阅材料安全数据表以获取详细信息。

检测步骤：

使用黑色平底板。在检测前，将所有试剂恢复至室温。

干扰：>10 uM的硫醇（如β-巯基乙醇、二硫苏糖醇等）会干扰此检测，应避免使用。

1.标准品制备。将6 uL 3 mM标准品与894 uL蒸馏水混合，制备900 uL 20 uM ADP预混合液。

2.样本制备。蛋白质含量高且可能具有ATP酶活性的样本（如细胞裂解液、血清等）在检测前需要脱蛋白和中和。脱蛋白时，每100 uL样本加入25 uL 10% TCA。涡旋振荡后，以14000 rpm离心10分钟。将100 uL清亮的上清液转移到干净的试管中，并用12.5 uL中和剂进行中和。对于细胞检测，至少需要使用1×10?个细胞。细胞应通过在100 uL dH?O中加入25 uL 10% TCA（每2×10?个细胞）进行匀浆裂解和脱蛋白，随后按照上述步骤进行离心和中和。注意：脱蛋白样本的测量ΔRFU值需要乘以1.41，以补偿样本稀释的影响。

3.将每个样本的40 uL分别转移到96孔板的各个孔中。对于含有丙酮酸的样本，将每个样本的40 uL分别加入到2个单独的孔中，其中一个孔将作为样本空白。

4.通过将45 uL试剂A、45 uL试剂B和1 uL酶混合，为每个孔制备工作试剂。如果样本中含有丙酮酸，则需要包括样本空白。对于样本空白，制备以下工作试剂：45 uL试剂A + 45 uL试剂B（不含酶）。向每个检测孔中加入80 uL相应的工作试剂。轻拍平板以混合。在室温下避光孵育30分钟。

5.在λexc = 530 nm和λem = 590 nm处读取荧光强度。

水中ADP标准曲线：

文献参考：

1. Bradbury DA, et al (2000). Measurement of the ADP:ATP ratio in human leukaemic cell lines can be used as an indicator of cell

viability, necrosis and apoptosis. J Immunol Methods. 240:79-92.

2. Chen-Scarabelli C, et al (2004). Turning necrosis into apoptosis: the exacting task that can enhance survival. Am Heart J. 148:196-9.

3. Clement CC (2008). Development of Resorufin Fluorescence Assays for monitoring the ATP-ase Activity of H    uman Chaperone Hsp-70.FASEB J. 22:791. 

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。