ED50 为半数有效浓度，其定义是可诱导 50%最大反应的细胞因子浓度，这种活性表示法仅适用于剂量反应曲线呈 S 形 的细胞因子。其实，可以将 ED50 的值接理解为 1unit。如某种细胞因子或蛋白的 ED50 为 1ng/ml，那么 1ng/ml 即可看作是 1unit。 那么我们也不难理解，1mg(1x106ng) 该细胞因子或蛋白中应含 1x106/1= 106units. ED50(ng/ml)转化为 units/mg 的公式如下：

与市场上的许多蛋白产品不同，ProSpec 的产品中均不含载体蛋白或其它添加物(如牛血清白蛋白(BSA)，人血清白蛋白 (HSA)和蔗糖等，并且是以最低含盐量的溶液进行冻干的，因此冻干后常常不能形成白色网架结构，而是微量的蛋白在冻干过程 中沉积在管内，形成很薄或肉眼不可见的透明蛋白层。打开管盖前，我们建议您在小离心机中快速离心 20-30 秒，使附着在管盖 或管壁上的蛋白聚集于管底。我们的质控步骤保证每管中所含的蛋白量准确无误，虽然有时您无法看到蛋白粉末，但管中的蛋白 含量仍是非常精确的。

除非在产品说明书中特别注明，ProSpec 相当一部分产品为冻干粉，它们在室温条件下非常稳定(至少 1 个月)。尽管如 此，我们还是建议您在收到我们的产品后保存于-20℃，以确保蛋白 100%的活性。对于大多数蛋白，重悬后在 4℃仅能短期保存 (约 1 周)。如想长期保存，请先配制成稀释液(其中必须含有载体蛋白，如 0.1% BSA，5%HSA，或 10% FBS)，然后分装冻存于 -20℃或-80℃。一定要避免反复冻融，因每次冻融均会引起蛋白的部分失活。

WB           Western Blot

WB-Ce   Western Blot (Cell lysate)         细胞裂解液（天然细胞，内源）

WB-Re   Western Blot (Recombinant protein)   重组蛋白（外源转染质粒到细菌，表达蛋白）

WB-Ti   Western Blot (Tissue lysate)      组织裂解液（天然组织，内源）

WB-Tr   Western Blot (Transfected lysate)      转染裂解液（外源转染质粒到细胞，表达蛋白）

实验类型选择优先（涵盖范围）：

WB > WB-Ti > WB-Ce  

WB-Re 和 WB-Tr，不推荐。如果客户购买，建议跟客户讲一下，非官网承诺应用类型，厂家不受理投诉。

【以1：500稀释比，30ul的小包装抗体为例】

1:500稀释 = 500ul 抗体稀释液中加入1ul原始抗体 ==》30ul原始抗体可以配置成为30ul * 500 = 15ml的稀释后的抗体【工作液】，一张玻片一般用50ul的抗体工作液 = 15 ml / 50ul = 300张

如果是1:200稀释的话，= 120张

作业：WB实验，一条膜通常需要1ml的工作液（1:1000稀释的话，需要加入1ul原始抗体溶液），实验次数自算？

PS: 1 ml = 1000 ul

· ELISA比色法实验显色，是一个酶催化的实验。在一定范围内，环境温度越高，酶活性越强，相同孵育时间内，温度高的，检测数据高。相同温度，孵育时间长的，检测数据高。

· 说明书的标曲只是一个参考用途，展示大概的结果形式。不能直接使用，否则，试剂盒就没有必要提供标准品了，客户直接用说明书的曲线来计算了，对吧。【每次实验，当时都需要做标准曲线，才是最准确的方法】

· 标准曲线是否良好？ 客户可以绘制相应的拟合曲线（线性，或者曲线形式），R2大于0.9以上是可以接受的，0.99那就是非常好，小数点后面9越多越好。

* 试剂盒规格的48或者96，通常代表的是反应次数或者孔的数量。而不是样品数量。（标准品，对照都会参与到反应或者加入到孔中，因此样品数量肯定会少）

试剂盒做一次实验，需要客户做：6个标准品（标准品数量，根据各个说明书里面说的来设置，6个浓度点）+ 一个空白孔（标准含量为0） = 7。通常每个实验都要做复孔（最少2个复孔，也有做3个复孔的。2个复孔意味着1个东西，需要加到2个孔，统计学需求，算平均值等），这么一来被占用的孔就是7*2=14个孔。96-14=82个孔，只有这82个孔可以给客户拿去测试他的样品。如果也算是复孔，那么就是82/2=41个样品。这是最多可以测试多少样品。

总结：

【2个复孔】样品数量= [ 96 - （标准品数量+对照组数量）*2] / 2

【3个复孔】样品数量= [ 96 - （标准品数量+对照组数量）*3] / 3

#强调#：标准品的数量，阳性对照，阴性对照 的设置，根据说明书来，有些试剂盒是没有阳性对照的。

以上为一次性将试剂盒用完的样品数量。如果客户要做2次实验，需要绘制2次标曲。对应的，继续相减。

1. 主要涉及ATP类的试剂盒，消耗能量ATP，发光（萤火虫）。

2. 主要的实验：荧光素酶分析实验。

使用仪器：

1. 化学发光仪，

2. 光度计（Luminometer），

3. 多功能酶标仪（含化学发光，生物发光检测模块）。

1.试剂盒使用前，通常需要在室温下平衡30-60min。(温度对酶催化反应有影响）。

2.洗板时需保证微孔板平放，将洗涤液注满各孔，但尽量避免漏液溢液，以每孔300 µl为宜；板洗次数一般为3次，要保证洗板的浸泡时间，每次浸泡时间一般为30-60 秒；尽量减少洗液残留量，推荐每次洗板后进行拍板，并及时更换吸水纸，避免吸水纸的碎屑粘到反应孔内。