常见问题-艾美捷科技有限公司

TECHNICAL COLUMN

常见问题

问

ALPCO ELISA故障处理指南

答

标准品和样品的重复性差（高CV值）
洗板不充分	对于自动洗板机：检查喷嘴是否堵塞，核实分液体积，并定期清洁以防止和去除任何积垢。请参阅用户手册以获取更多维护信息。对于手动洗涤：确保所有孔都被充分过量填充洗涤缓冲液。避免使用多通道移液器进行洗涤。考虑从洗瓶切换到手持歧管或自动洗板机，特别是在进行化学发光分析时。不要跳过洗涤或浸泡步骤。
多通道移液器在添加偶联物或底物时的问题	检查多通道移液器的校准。确保所有移液头安装牢固，每次更换移液头时吸取相同体积的液体。观察移液过程中是否有气泡，并考虑采用反向移液技术以确保气泡不会影响移液的准确性。
移液技术	检查单通道移液器的校准。观察移液过程中是否有气泡，并考虑采用反向移液技术以确保气泡不会影响移液的准确性。
孔中的气泡	确保每次洗涤步骤后用力拍干板孔，以尽量减少孔内的残留洗涤缓冲液。

仅针对样本的重复精度差（高CV值）
样品混合不充分	在移液前对每个样品进行涡旋，以确保样品均匀。
移液技术	在将第一次样品复制转移到板上之前，将样品吸进和吸出两次，以覆盖尖端内部。在转移样品时，确保没有样品液滴粘附在尖端外部。如果体积允许，考虑反向移液技术，以确保气泡不干扰移液的准确性。
洗板不充分	对于自动洗板机：检查喷嘴是否堵塞，核实分液体积，并定期清洁以防止和去除任何积垢。请参阅用户手册以获取更多维护信息。对于手动洗涤：确保所有孔都被充分过量填充洗涤缓冲液。避免使用多通道移液器进行洗涤。考虑从洗瓶切换到手持歧管或自动洗板机，特别是在进行化学发光分析时。不要跳过洗涤或浸泡步骤。
从高样本和低样本进行结转	确保在每个样品之间更换移液吸头。每次孵育使用新鲜的封口机。
错误的样品稀释缓冲液	如果样品需要稀释，确认使用了适当的稀释缓冲液。

标准曲线差（与以前的结果或COA不匹配）
洗板不充分	对于自动洗板机：检查喷嘴是否堵塞，核实分液体积，并定期清洁以防止和去除任何积垢。请参阅用户手册以获取更多维护信息。对于手动洗涤：确保所有孔都被充分过量填充洗涤缓冲液。避免使用多通道移液器进行洗涤。考虑从洗瓶切换到手持歧管或自动洗板机，特别是在进行化学发光分析时。不要跳过洗涤或浸泡步骤。
移液技术	检查单通道移液器的校准。观察移液过程中是否有气泡，并考虑采用反向移液技术以确保气泡不会影响移液的准确性。
试剂混合不充分	允许重组试剂在使用前按照说明书规定的时间静置。使用合适的设备（旋涡混合器等）确保试剂在使用前均匀。如果混合试剂盒试剂，制备工作液，确认使用了正确的体积和稀释剂。
震动不足	不正确的震荡可能导致混合不足和抗体/分析物相互作用。以使用说明中推荐的速度摇板。建议使用半径很小的轨道运动振动筛。
往孔中加入的试剂量不对	检查剩余体积，确认添加到孔中的试剂体积正确。
配制试剂的储存	确保所有试剂妥善储存，并在规定的有效期内使用。在化学发光分析中，提前制备发光基板可以降低信号。
环境温度低或不一致	按照方案中规定的孵育温度。
化学发光仪器的差异	信号，或相对光单位（rlu），可以显着变化从一个化学发光板阅读器到另一个。在“典型”标准曲线或分析证书中显示的信号可能与观察到的信号大不相同。

所有的孔变成明亮的蓝色进行比色测定
洗板不充分	对于自动洗板机：检查喷嘴是否堵塞，核实分液体积，并定期清洁以防止和去除任何积垢。请参阅用户手册以获取更多维护信息。对于手动洗涤：确保所有孔都被充分过量填充洗涤缓冲液。避免使用多通道移液器进行洗涤。考虑从洗瓶切换到手持歧管或自动洗板机，特别是在进行化学发光分析时。不要跳过洗涤或浸泡步骤。
底物被酶偶联物污染	确保所有的容器干净并有清晰的标记。检查TMB是否有蓝色。如果TMB已经变成蓝色，请不要在您的分析中使用，并联系产品支持。使用前不要将基材暴露在光下。使用一个新的试剂容器来添加每种成分。

背景过高（空白或0标准值过高）
洗板不充分	对于自动洗板机：检查喷嘴是否堵塞，核实分液体积，并定期清洁以防止和去除任何积垢。请参阅用户手册以获取更多维护信息。对于手动洗涤：确保所有孔都被充分过量填充洗涤缓冲液。避免使用多通道移液器进行洗涤。考虑从洗瓶切换到手持歧管或自动洗板机，特别是在进行化学发光分析时。不要跳过洗涤或浸泡步骤。
洗涤缓冲液陈旧或受污染	洗涤缓冲液储存时间过长或留在自动洗涤管中会造成污染。根据需要准备新鲜的洗涤缓冲液，定期清洁自动洗涤设备。
底物被酶偶联物污染	确保所有的容器干净并有清晰的标记。检查TMB是否有蓝色。如果TMB已经变成蓝色，请不要在您的分析中使用，并联系产品支持。使用前不要将基材暴露在光下。使用一个新的试剂容器来添加每种成分。
错误的共轭稀释	浓度高于正常水平可能导致本底升高。检查剩余体积，确认共轭物制备正确。
读板器用错滤光片	在读取结果时，请确认使用协议中指示的正确滤波器。如使用说明所示，包括推荐的空白减法或外径读数。

标准品和样品没有显色或非常低的OD读数
读板器用错滤光片	在读取结果时，请确认使用协议中指示的正确滤波器。
试剂制备错误	确保所有容器都有清晰的标记，并将适当的浓缩物和稀释剂添加到正确的小瓶中，以使每个组分的工作液用于检测。
试剂混合不充分	允许重组试剂在使用前按照说明书规定的时间静置。使用合适的设备（旋涡混合器等）确保试剂使用前均匀。
板震荡不足	不正确的震荡可能导致混合不足和抗体/分析物相互作用。以使用说明中推荐的速度摇板。建议使用半径很小的轨道运动振动筛。
试剂混淆	如果一次运行多个分析，保持试剂分离以避免混淆。在向检测板添加试剂之前，仔细检查试剂标签。
试剂被污染或添加顺序错误	验证所有分析成分的外观、储存条件和有效期。按照协议中_x0002_的指示执行步骤。确保每个组件按正确的顺序添加。
使用了替代的组件批号或过期的组件	有些组件是高度特定的批次。始终与制造商核实备用组件批号的使用情况。请勿使用超过有效期的试剂。
实验孵育时间未正确执行	按照方案中指示的孵育时间和温度进行操作。减少任何一个因素都会影响分析动力学，并可能导致低信号。如果方案列出了TMB孵育的时间范围，请确保该分析正在孵育建议的最大时间。
读数延迟	如果使用化学发光ELISA，应在短时间内读取板。请查阅协议，了解套件特定的时间安排。延迟读数会导致信号减少。

样品无显色或极低OD读数
实验设计误差	调查样品来源。如果可能，使用替代方法测试样品，以确认样品在工作分析范围内对感兴趣的生物标记物呈阳性。当刺激生物标志物的产生时，可能需要调整实验设计。
不正确的样品处理	确保样品没有暴露在室温下或冷藏过长时间。验证样品没有经历重复的冻融循环。如有可能，在≤-70°C的温度下对样品进行分馏和保存。
样品稀释计算误差	验证样品稀释度是否正确。如有必要且在试剂盒规格范围内，以更高的浓度（更低的稀释度）重新测试样品。
未验证样品类型	未经验证的样品类型可能与检测缓冲液或试剂盒的检测范围不兼容。
板晃动不足	不正确的摇动运动可能导致混合不足和抗体/分析物相互作用。以使用说明中推荐的速度摇板。建议使用半径很小的轨道运动振动筛。

检测区间范围外
不正确的试剂处理	确保试剂已妥善储存和处理，并在有效期内。请注意，一些试剂在重构后的保质期有限。
标准曲线差	验证使用了合适的标准曲线，并将结果与之前的测定值和分析证书中给出的值进行核对。请参阅“差标准曲线”部分了解更多信息。注：对于化学发光测定，RLU可以显著变化从一个化学发光阅读器到另一个。
重建标准和/或控制时的错误	参见标准品/校准器和对照品重组的正确体积和缓冲液的协议和批次特定分析证书。允许重组试剂在使用前按照说明书规定的时间静置。使用合适的设备（旋涡混合器等）确保试剂在使用前均匀。
曲线拟合错误	使用方案中推荐的曲线拟合。如果提供了多个建议，则使用最适合标准数据点的回归方法。强烈建议使用带有4参数和5参数回归选项的软件程序。

样本的意外结果
制备不当的样品	按照协议中的方法进行适当的样品制备。确保样品没有暴露在室温下或冷藏过长时间。验证样品没有经历重复的冻融循环。如有可能，在≤-70°C的温度下对样品进行分馏和保存。
样品编号混淆	检查样品编号以确认它们已被标记，并正确添加到板上。
样品稀释误差	验证样品稀释度是正确的，如果需要，外推的样品值乘以正确的稀释系数。
报告单位差异	确认所报告的计量单位与测定的计量单位一致。执行任何必要的转换计算。当比较在不同试剂盒中获得的值时，如果有参考标准，一定要纠正测定校准中的任何差异。
实验设计误差	调查样品来源。如果可能，使用另一种方法测试样品以确认期望的样本值。当刺激生物标志物的产生时，可能需要调整实验设计。
干扰物质	考虑与样品基质相关的潜在干扰物质（如使用的抗凝剂）、临床诊断（如类风湿因子）或治疗。
特异性	在不同的系统（大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞系）中表达的天然蛋白和重组蛋白的识别可能因糖基化、蛋白折叠和抗体特异性的差异而有所不同。识别可能因供应商的工具包而异。

测定漂移：从平板开始到结束的数值差异
由于重组或稀释造成的延迟	在开始分析工作流程之前准备好标准品、对照品和稀释样品。
非恒温试剂	在实验开始前，确保所有需要的试剂都在室温下，如使用说明中所述。
第一孔和最后一孔添加试剂的时间间隔延长	如果可能，在稀释板或微滴管中准备标准品和对照品，然后使用多通道移液管转移到测定板上。使用试剂库和多通道移液器将常用试剂添加到检测板上。

测定间可变性（对照或样品在不同板上测试的精度较差）
Inter-operator可变性	观察试剂制备、移液技术和测定时间的差异。
移液器校准的差异	移液器校准的差异会引入可变性，特别是在移液小体积时。
仪器差异	当在同一天或不同的日子在多个板上测试样品或对照物时，应在相同的设置下使用相同的摇板器、洗板器和读板器。
环境条件的变化	注意温度的差异。请记住，一般的室温，靠近窗户（特别是在非常寒冷或非常晴朗的日子），以及靠近可能散发热量的仪器都会影响检测温度。
样品处理差异	额外的冻融循环或在室温或冰箱中增加的时间可能会影响样品结果。

问

GERBU佐剂--常见问题解答FAQ

答

GERBU公司在原材料采购和制造领域有超过25年的丰富经验。GERBU提供广泛的精细化学品，生物试剂，缓冲液，洗涤剂，介质等。例如ACES、AEBSF、白蛋白、氨苄青霉素、抗生物素蛋白、DTT、甘氨酸、HEPES、IPTG、烟酰胺衍生物等。GERBU完美的生物相容性佐剂已经越来越成为单克隆和多克隆抗体生产的标准。
以下为GERBU佐剂的一些常见问题解答：

混合抗原肽FAQ:
Question：抗原-佐剂混合物是如何制备的?
Answer：将抗原溶液与佐剂按1:1的体积比加入无菌试剂瓶中，摇匀。避免泡沫形成。每只动物使用一根单独的无菌针。

Question：注射的最佳pH值是多少?
Answer：GERBU佐剂的pH值范围为5.6 - 5.8。推荐注射pH值为7.0-7.3。

Question：推荐使用哪些缓冲液?
Answer：我们推荐10 ~ 25 mM (pH = 7.3)范围内的Tris作为缓冲液。确切的浓度取决于蛋白质(抗原性)。

Question：根据说明书，应避免使用多价缓冲液(磷酸盐/柠檬酸盐)。助剂会絮凝吗?
Answer：如果可能的话，使用水(去矿化水)来稀释抗原。聚阴离子化合物会导致沉淀。如果不可避免，使用尽可能少的PBS。注射前请确保抗原/佐剂混合物没有凝固。

Question：我的抗原是稀溶的。你推荐哪种溶剂?
Answer：乙醇。将不溶于水的抗原溶解在乙醇中。然后用合适的水缓冲体系将乙醇预溶液缓慢稀释至10倍体积，再与佐剂配制成1:1的混合物。请不要超过5%乙醇的终浓度。

Question：哪些添加剂和溶剂不应该使用?
Answer：我们强烈建议不要注射变性剂(如SDS，尿素)和螯合剂(如EDTA)，以及大分子缓冲物质(如HEPES)。

抗原特性FAQ
Question：蛋白质复合物的非共价键被破坏了吗?
Answer：蛋白质的四级结构不受影响。通过这种方式，可以保留功能并相应呈现特定的表位。

Question：GERBU佐剂是否与细胞或DNA作为抗原混合?
Answer：您可以将GERBU佐剂与DNA或任何质粒混合。

Question：是否有将牛血清白蛋白溶解为抗原的处方?当必须使用弱抗原性的小分子进行免疫时，GERBU佐剂是否适合作为BSA的载体蛋白?
Answer：BSA作为小分子载体，增强抗原的抗原性和小分子表位的呈现。将500 mg粉状牛血清白蛋白溶于0.5 ml水(50% w / v)中，或350 mg牛血清白蛋白溶于0.65 ml 0.85% NaCl (35% w / v)中，配制成透明可给药的混合物。在免疫过程中，事先将这些溶液与GERBU佐剂直接按1:1的体积比混合。

Question：对于抗原性较弱的抗原，如何改进检测结果?
Answer：弱抗原比强抗原需要更有效的免疫启动物。但免疫时使用的抗原剂量不宜过高，以免宿主动物对抗原产生免疫耐受。建议更频繁地加强注射。

Question：有关于蛋白质结合能力的信息吗?
Answer：具体问题请联系技术支持。

注射FAQ
Question：免疫过程是如何进行的?
Answer：将免疫悬液置于室温或体温(20°C至37°C)。确保它不含任何大颗粒。使用无菌注射设备，将剂量缓慢地注入每个免疫部位。该应用是皮下实施到皮下脂肪组织。如果可能的话，在个体上形成一个皮肤褶皱，以便在那里注射。请按照相应的使用说明注射部位的数量和各自的最大体积。

Question：幼龄动物可以服用多少剂量?
Answer：根据方案与其他动物进行体重比较。

Question：也可以肌肉注射吗?
Answer：肌肉内注射通常是耐受良好的，但我们不建议这样做，因为它会给动物带来更多的压力。鸡可能会停止下蛋。

Question：为什么不静脉注射GERBU佐剂?
Answer：静脉注射违反了动物福利法。它不会提高整体效率。

Question：注射部位是否有免疫反应?
Answer：复合疫苗的作用可能有延迟效应，短期免疫原性反应是可能的。佐剂建立了一个仓库，并在皮肤下保持可见的短时间。

保质期FAQ
Question：GERBU佐剂保存在冰箱(4-8°C)中，原始包装未打开。在那里，可以看到细小的沉淀和凝集，并且看起来很粘稠。这个产品还可以注射吗?
Answer：GERBU佐剂自生产之日起稳定3年(2-8°C)。如果GERBU佐剂在不搅拌的情况下长时间存放在阴凉的地方，成分可能会分离和结晶。这对产品质量没有影响。一旦被带到室温和充分混合，得到均匀的悬浮液。

Question：GERBU佐剂在第一次收集后的保质期是多长?
Answer：在冰箱无菌条件下存放至少1/2年。

Question：佐剂-抗原混合物呈泡沫状/沉淀状/块状。它还能被使用吗?
Answer：不，因为期望的抗原性不再存在。此外，动物可能会受到伤害。

Question：GERBU佐剂与抗原混合后，这种乳剂在什么条件下可以保存多久?
Answer：当佐剂与抗原混合时，应直接注射乳剂。如果抗原稳定，乳剂可在室温下保存3个月。抗原/佐剂混合物的稳定性取决于抗原和缓冲液的性质。

与其它佐剂的比较FAQ
Question：GERBU佐剂的处理是否与弗氏佐剂(FCA/FIA)相当?
Answer：使用GERBU佐剂时，不需要用两支注射器制备乳剂。两种情况下抗原/佐剂的混合比例均为1:1。详细说明请参阅协议。

Question：不同品种的GERBU佐剂的批号是否存在差异?也就是说，不同批次在体内产生抗体的速率不同吗?
Answer：生产过程按GMP规范进行。所有的GERBU佐剂批号都要经过内部质量控制。检查佐剂的具体参数是否在规定范围内。特异性抗体滴度的产生不依赖于GERBU佐剂的特定批号。抗体的产生总是取决于动物的体质和所用抗原的性质。

Question：我之前使用的是GERBU佐剂10/100 / LQ。为什么它不再可用?
Answer：当时的配方差别不大，主要在于包装尺寸。我们进一步改进了配方，将三种产品合二为一。今天它被称为佐剂P。

Question：我之前用了不同的佐剂。现在我想切换到GERBU。我可以简单地继续给动物注射GERBU佐剂吗?
Answer：使用不同的佐剂系统会以意想不到的方式影响结果和动物的状况。我们建议在更换佐剂之前暂停注射一段适当的时间，以使动物的免疫系统有时间再生。但在短期实验中，无论如何不应改变佐剂。

特定应用FAQ
Question：通常会生成哪个抗体子类?
Answer：原则上，所有的抗体亚类都可以产生。实验装置必须作相应的调整。

Question：GERBU佐剂适合体外应用吗?
Answer：根据我们的经验，GERBU佐剂适用于产生重组抗体、嵌合抗体、合成抗体等。

Question：在体内使用GERBU佐剂是否可能在小鼠体内产生高质量和足够数量的针对天然表位的单克隆和多克隆抗体?
Answer：可以与活性物质(靶标)结合的生物分子类型和所使用的免疫原的三级/四级结构对免疫反应有很大影响，即抗原的三维形状及其复杂结构非常重要。

Question：我想使用GERBU佐剂进行商业抗体生产。除了产品价格外，我还需要支付许可费吗?
Answer：GERBU佐剂是为商业用途而开发的。没有额外的许可费。
问

关于产品运输和保存条件的说明

答

尊敬的客户：
感谢您选用艾美捷科技代理品牌的产品，您的信任和支持是我们的动力！
您可能注意到了部分产品的运输条件和保存条件不一致，也许这会让您担心产品的质量。我们非常理解您的顾虑，对此我们特别说明如下：

运输条件是根据在短期运输过程中不影响产品质量的原则，经由对应品牌厂家测试后制定的，可能有别于推荐的长期储存条件（为了更长的保存时间）。某些产品在短期内（如运输时）不按长期保存条件保存并不会影响到其质量。而那些在短期内对温度条件敏感的产品则将加蓝冰（冰袋）或干冰运输，以防止温度骤变给产品稳定性造成影响。

客户在收到产品包裹的时候，冰袋会出现融化的正常现象，它主要在整个运输过程中起到延缓温度骤变的作用，厂家生产试剂时会有稳定性处理，不会影响效能。

绝大部分试剂在实验开始前，需要将试剂恢复到室温。如果您收到货时温度为常温，不用担心，这些都在厂家产品开发时的考虑范畴内。如果当日即用，就不用再解冻可以尽快实验，如当下不用，就尽快按照产品长期储存温度保存即可，如果后续是多次使用则建议先分装后再保存，避免多次反复冻融。如使用中遇到问题可以及时联系艾美捷科技。

艾美捷以产品的品质为第一位，完全按照品牌厂家的运输条件执行，以最大的努力满足客户，赢得客户信赖。如您有任何关于产品保存和运输条件相关的疑问，请拨打我司服务热线：400-6800-868 或 027-59626688，我们将竭诚为您服务。

此致，
敬礼！
武汉艾美捷科技有限公司时间：2022 年 8 月 18 日星期四