NanoTag-ALFA选择器ST，保证目标蛋白的可及性，消除批次间的变化

ALFA选择器ST（“超紧”）是一种创新的高亲和力树脂（琼脂糖&磁性），专为高效且干净地捕获ALFA标签蛋白而设计。

ALFA选择器ST基于一种单域抗体（sdAb），这种抗体共价固定在4%交联的琼脂糖或琼脂糖磁性珠子上，能够以极高的亲和力（Kd = 26 pM）结合ALFA标签蛋白。 目标蛋白可以在酸性（例如，0.1 M 甘氨酸，pH 2.2）或变性条件下从ALFA选择器ST中高效释放。与ALFA标签蛋白的极其紧密的相互作用使得使用ALFA洗脱肽的竞争性洗脱效率低下。NanoTag建议使用ALFA选择器PE进行在生理条件和室温下的竞争性洗脱。对于在4°C下进行高效洗脱，NanoTag建议使用ALFA选择器CE。

ALFA选择器ST的创新之处在于，它通过柔性连接链以定向和高度选择性的方式固定活性sdAb，这不仅保证了目标蛋白的最佳可及性，同时大大消除了批次间的变化。 由于sdAb的单链性质及其共价连接，在使用强变性和还原条件（例如SDS样品缓冲液）进行洗脱时，也不会观察到IgG的轻链和重链的“泄漏”。因此，ALFA选择器ST具有对ALFA融合蛋白的高亲和力和卓越容量，同时显示出可忽略不计的非特异性背景。

ALFA选择器ST不仅与生理缓冲液兼容，还与高严格性缓冲液兼容。 因此，ALFA选择器ST为根据实验需求调整结合和洗涤条件提供了极大的自由度。

艾美捷ALFA选择器ST：

货号：N1511

克隆号： 1G5

宿主： 骆驼

生产方式： 大肠杆菌

应用： 免疫沉淀（IP）

容量： > 3 ug ALFA标签GFP每uL装填珠子

靶标： ALFA标签

特异性： 识别ALFA标签（SRLEEELRRRLTE）

配方：50%的PBS悬浮液，含有20%乙醇

运输条件： 常温

保存条件：在4°C下保存，最长可达12个月。不要冷冻！

注意事项： 仅限体外使用/仅用于研究。无毒、无害、无传染性。

实验示例：

使用ALFA选择器ST磁性珠子进行一步亲和纯化的示例。

将纯化的GFP-ALFA（左泳道）混入HeLa细胞裂解液（输入）中，并与ALFA选择器ST磁性珠子孵育。洗涤后，珠子依次与500 uM ALFA肽孵育2次，每次10分钟（E1：肽），然后用SDS样品缓冲液洗脱剩余蛋白（E2：SDS）。指示的各部分通过SDS-PAGE和考马斯染色进行分析。洗脱部分对应于从1 uL树脂洗脱的物质；B为不含底物的对照实验。

文献参考：

Geraud M, Cristini A, Salimbeni S, et al. TDP1 mutation causing SCAN1 neurodegenerative syndrome hampers the repair of transcriptional DNA double-strand breaks. Cell Rep. 2024;43(5):114214. doi:10.1016/j.celrep.2024.114214 (CoIP; HEK293T)

van Zwam MC, Dhar A, Bosman W, et al. IntAct: A nondisruptive internal tagging strategy to study the organization and function of actin isoforms. PLoS Biol. 2024;22(3):e3002551. Published 2024 Mar 11. doi:10.1371/journal.pbio.3002551 (CoIP; HT1080 cells)

Kohler V, Kohler A, Berglund LL, et al. Nuclear Hsp104 safeguards the dormant translation machinery during quiescence. Nat Commun. 2024;15(1):315. Published 2024 Jan 5. doi:10.1038/s41467-023-44538-8 (UV-activated site-specific crosslinking; yeast)