酸性磷酸酶(ACP)是一种在消化过程中催化磷酸基团从其他分子上水解的酶。酸性磷酸酶存在于溶酶体中,并在与内体融合后激活,内体酸化pH值,从而为ACP创造了最佳的活性环境。ACP还存在于骨骼、脾脏、肝脏、肾脏和血液中。血清中的ACP水平可以作为前列腺癌的生物标志物,尽管前列腺特异性抗原(PSA)更为广泛使用。
BioAssay Systems的非放射性荧光法ACP测定基于合成底物的水解。产物甲基伞形酮(MUB)在加入终止试剂后会发出强烈的荧光。加入终止试剂后在360/450纳米处荧光强度的增加与酶活性成正比。
作为BioAssay Systems在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品酸性磷酸酶测定试剂盒。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
产品名称 | 货号 | 详情 |
酸性磷酸酶测定试剂盒 | BAS-FACP-100 | 查看 |
酸性磷酸酶测定试剂盒:
主要特点:
- 快速且灵敏:线性检测范围(20微升样本):0.008到10 U/L,反应时间为30分钟。
- 便捷且高通量:均质“混合-孵育-测量”型测定。可轻松在高通量筛选液体处理系统上自动化操作,每天可处理数千个样本。
应用范围:
- 生物样本中酸性磷酸酶活性的测定(例如血浆、血清、细胞裂解液、组织样本)。
试剂盒组成(96孔板,100次测试):
- 测定缓冲液:12毫升
- MUB底物:120微升
- 终止试剂:12毫升
- 标准品:120微升
储存条件:
- 试剂盒在室温下运输。收到后将所有组分储存于-20摄氏度。有效期:收到后6个月。
注意事项:
- 试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规预防措施。请参阅材料安全数据表以获取详细信息。
操作步骤:
该测定基于动力学反应。为确保孵育时间一致,加入底物和终止试剂到样本中的操作应迅速,混合应简短但彻底。建议使用多通道移液器。
样本准备:
- 血清和血浆:应稀释2-5倍。
- 组织:在解剖前,用Tris缓冲盐水(pH 7.4)冲洗组织以去除血液。将组织(50毫克)在约200微升50毫摩尔/升Tris缓冲液(pH 7.5)中匀浆。在4摄氏度下以14,000g离心10分钟。取上清液用于测定。
- 细胞裂解液:通过在4摄氏度下以2,000g离心5分钟收集细胞。对于贴壁细胞,不要使用蛋白酶酶收获细胞,而是使用橡胶刮刀。在适量的冷50毫摩尔/升Tris缓冲液(pH 7.5)中匀浆或超声处理细胞,每毫升约一百万细胞。在4摄氏度下以14,000g离心10分钟。取上清液用于测定。
- 所有样本:可在-80至-20摄氏度下储存至少一个月。
试剂准备:
将所有组分平衡至所需的反应温度(例如25摄氏度或37摄氏度)。
标准品准备:
将25微升标准品(MUB)与475微升去离子水混合,制备100微摩尔/升的预混液。
反应准备:
1. 将每个样本的20微升分别加入不同的孔中。将每个标准品的20微升加入黑色平底96孔板的孔中。
2. 每孔将85微升测定缓冲液和1微升MUB底物混合,制备工作试剂。将80微升工作试剂加入所有标准品和样本孔中。轻拍孔板以混合。
3. 在25摄氏度或所需温度下孵育30分钟。向每个孔中加入50微升终止试剂。轻拍孔板以混合。
4. 在360/450纳米处读取荧光。
所需材料(但未提供):
- 移液装置及配件(例如多通道移液器)、黑色平底96孔板(例如VWR产品编号89089-582)、离心管和酶标仪。
文献参考:
1. Henneberry, M.O.; Engel, G.; Grayhack, J.T. (October 1979). “Acid Phosphatase”. The Urologic clinics of North America 6 (3): 629–41.
2. Bull, H.; Murray, P.G.; Thomas, D.; Fraser, A.M.; Nelson, P.N. (April 2002). “Acid Phosphatases”. Molecular Pathology 55 (2): 65–72.Retrieved 11 May 2015.
3. Taira A, Merrick G, Wallner K, Dattoli M (July 2007). "Reviving the acid phosphatase test for prostate cancer". Oncology (Williston Park,N.Y.) 21 (8): 1003–10.
BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司,专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒,产品种类齐全,主要用于科学研究和生物医药开发,以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验,已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括:1.血液尿液化学;2.酶活性测定;3.能量代谢;4.氧化应激;5.高通量HTS试剂;6.阴阳离子检测。
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