重组人R-spondin 1 LR5蛋白被设计为LGR5受体的高亲和力配体。在上皮组织中,LGR5标记干细胞群。这种工程蛋白R-spondin 1 LR5仅在LGR5+干细胞群中激活Wnt信号传导。
R-spondin 1 LR5已在肠道类器官培养中进行了测试,并支持类器官的存活和生长。由于LGR5特异性标记干细胞,并且在转运扩增细胞上没有发现,因此在含有R-spondin 1 LR5的类器官培养物中观察到的较低隐窝多样性(与野生型R-sponding 1,Qk006相比)支持了这种工程形式特异性作用于干细胞的观点。这种特殊形式的R-spondin 1是在Marc de la Roche的实验室(剑桥大学)开发的。
艾美捷QKine重组人R-spondin 1 LR5蛋白(Qk031):
摘要:高纯度重组人R-spondin 1 LR5蛋白。与LGR5受体具有更高的亲和力。
纯度 >98%,通过SDS-PAGE定量密度分析测定
分子量:13 kDa
表达系统:大肠杆菌(E. coli)
无动物源成分(AOF)且无载体蛋白
在英国剑桥的实验室生产
冻干自乙腈/三氟乙酸
复溶方法:在10 mM HCl中复溶至>100 ?g/ml(提供蛋白且免费),制备单次使用分装,如需可添加载体蛋白,然后在-20℃或-80℃冷冻保存
推荐应用:
肠道类器官培养
进一步质量检测:
质谱分析:单一物种,具有预期质量
分析型反相色谱:单一尖锐峰
内毒素:<0.005 EU/?g蛋白(低于检测水平)
从原瓶回收率:>95%
R-spondin 1在TOP-Flash报告基因检测中增强Wnt信号传导
在Wnt响应性萤火虫荧光素酶报告基因TOP-FLASH转染的HEK293T细胞中,用不同浓度的Qk031 R-spondin 1 LR5(在含0.5%胎牛血清的DMEM中稀释)处理细胞,并在Wnt条件培养基(1:8稀释)存在的情况下进行实验,每组三个重复。细胞培养过夜后,通过发光法测量荧光素酶活性。数据来自Qk031批次#104286。EC?? = 476 ng/ml(38 nM)。与野生型R-spondin 1 Qk006(72.7 ng/ml,6 nM)相比,EC??较高,这是由于HEK293细胞上的受体群体所致。
SDS-PAGE分析
在非还原(NR)条件下,重组R-spondin 1 LR5蛋白以16 kDa的单一带迁移;在还原(R)条件下,迁移为13 kDa。1 ?g纯化重组蛋白通过15%(w/v)SDS-PAGE在还原(+β-巯基乙醇,R)和非还原条件(NR)下分离,并用考马斯亮蓝R250染色。数据来自Qk031批次#104286。
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