NanoTag-PentaTag对照蛋白DYKDDDDK-HA-MBP-Myc-ALFA实验示例说明

一种包含FLAG、HA、MBP、Myc和ALFA标签的对照蛋白。

五标签对照蛋白是一种重组融合蛋白，由大肠杆菌麦芽糖结合蛋白（MBP）与四种常用的表位标签融合而成：DYKDDDDK（FLAG）、HA、Myc和ALFA。它的分子量为47.8 kDa，可用作西方印迹、点印迹、免疫沉淀或酶联免疫吸附试验的阳性对照。五标签对照蛋白的标签顺序从N端到C端依次为：FLAG、HA、MBP、Myc和ALFA。

艾美捷PentaTag对照蛋白DYKDDDDK-HA-MBP-Myc-ALFA：

货号：P0102

制备于：大肠杆菌

应用：酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫沉淀（IP）、西方印迹（WB）

靶点：ALFA标签、MBP

配方：从pH 7.4的PBS中冻干，含量为100 ug。用100 uL去离子水中的50%甘油（体积比）复溶。复溶后的最终浓度为1 mg/mL。

kDa：47.8

消光系数：72310

运输：常温

储存：冻干试剂可在2-8°C下保存长达12个月。复溶后，应在-20°C或更低温度下保存。

注意事项：仅用于体外/研究目的。无毒、无危害、无传染性。

A 五标签对照蛋白DYKDDDDK-HA-MBP-Myc-ALFA（NanoTag#P0102）的示意图。

B 每道加入2ug五标签对照蛋白的SDS-PAGE分析。凝胶用考马斯亮蓝染色。

C 使用10或100ng重组蛋白每道的五标签对照蛋白的西方印迹分析。印迹如下检测：

DYKDDDDK：1.抗FLAG M2（Sigma#F1804）1:1000；2.FluoTag?-X2抗小鼠IgG1 Atto643（NanoTag#N2002）1:5000；

HA：1.抗HA克隆F-7（Santa Cruz#sc-7392）1:200，2.FluoTag?-X2抗小鼠IgG2a/b Atto643（NanoTag#N2702）1:5000；

MBP：1.抗MBP（Synaptic Systems#416003）1:5000，2.FluoTag-X4抗兔IgG Atto643（NanoTag#N2404）1:5000；

Myc：1.抗Myc克隆9E10（Synaptic Systems#343011）1:1000，2.FluoTag?-X2抗小鼠IgG1 Atto643（NanoTag#N2002）1:5000，

ALFA：FluoTag?-X2抗ALFA Atto643（NanoTag#N1502）1:5000。

所有印迹均使用643nm的激发波长和665nm的发射波长进行荧光检测。

文献参考：

G?tzke H, Kilisch M, Martínez-Carranza M, Sograte-Idrissi S, Rajavel A, Schlichthaerle T, Engels N, Jungmann R, Stenmark P, Opazo F, Frey S. The ALFA-tag is a highly versatile tool for nanobody-based bioscience applications. Nat Commun. 2019 Sep 27;10(1):4403. doi: 10.1038/s41467-019-12301-7. PMID: 31562305; PMCID: PMC6764986.