BPS Bioscience 全长 Notch1/CSL 荧光素酶报告基因 HEK293 细胞系，用于药物发现和免疫治疗研究

描述

全长Notch1/CSL荧光素酶报告基因HEK293细胞系是一种表达萤火虫荧光素酶报告基因的HEK293细胞系，该报告基因受Notch响应元件（CSL响应元件）和全长Notch1（登录号：NM_017617.5）的控制。在配体-受体相互作用后，Notch1受体被γ-分泌酶切割。这种活跃的Notch1 NICD（Notch细胞内域）转移到细胞核并诱导荧光素酶报告基因的表达。

该细胞系在DAPT和DLL4的作用下，对荧光素酶报告基因表达的激活和抑制都进行了功能性验证。

背景

Notch信号通路在进化上高度保守，在癌症中作为维持癌症干细胞特性和诱导肿瘤血管生成的关键驱动因素发挥着重要作用。哺乳动物拥有四种不同的单跨膜Notch受体，即Notch1-4。Notch配体有两个家族的跨膜蛋白，包括Delta样配体（DLL1、DLL3和DLL4）和Jagged（JAG1和JAG2）。Notch信号通路由配体-受体结合启动，经历由ADAM（含血栓素结构域的解聚素和金属蛋白酶）家族蛋白酶和γ-分泌酶进行的两步蛋白水解切割。释放的Notch细胞内域（NICD）转移到细胞核，并与具有DNA结合转录因子RBP-J（CSL）、mastermind-like（MAML）蛋白和其他共激活蛋白的转录复合体相互作用，以刺激Notch靶基因的表达。Notch信号通路可以通过两大类Notch抑制剂阻断：小分子γ-分泌酶抑制剂和特异性结合Notch配体或受体的单克隆抗体。Notch信号参与多种组织和器官的发育和稳态。Notch信号的功能障碍有严重后果，包括发育病理或癌症（如T细胞急性淋巴细胞性白血病、T-ALL和尿路上皮膀胱癌）。Notch抑制剂的使用，主要是γ-分泌酶抑制剂，作为癌症治疗选项和组织再生正在进行中。进一步的研究将使我们对Notch信号有更深入的理解，并将有利于未来的治疗途径。

作为BPS Bioscience在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BPS Bioscience热销产品全长 Notch1/CSL 荧光素酶报告基因 HEK293 细胞系。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

应用

? 筛选和验证针对Notch1的抗体，用于药物发现和免疫治疗研究。

? 在细胞模型中筛选Notch信号通路的小分子抑制剂。

? 进行配体/受体结合实验，筛选潜在的Notch1通路抑制剂。

细胞解冻

1. 从液氮储存中取出一个细胞瓶。在准备解冻前保持在干冰上。

2. 准备解冻时，在37°C水浴中摇晃冷冻细胞瓶大约60秒。一旦细胞解冻（可能比60秒稍快或稍慢），迅速将瓶中全部内容物转移到一个空的50毫升锥形管中。

注意：在37°C水浴中放置过久会导致细胞活性迅速丧失。

3. 使用10毫升的血清学移液管，慢慢向含有细胞的锥形管中加入10毫升预温的解冻培养基1。解冻培养基1应滴加同时轻轻摇晃锥形管，以实现温和混合并避免渗透休克。

4. 立即以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在5毫升预温的解冻培养基1中重悬细胞。

5. 将重悬的细胞转移到T25或T75培养瓶中，并在37°C的5% CO2培养箱中培养。

6. 培养24小时后，检查细胞附着和活性。更换为新鲜的解冻培养基1，并在37°C的5% CO2培养箱中继续培养，直到细胞准备好传代。

7. 细胞应在完全融合前传代。在第一次传代及后续传代中，使用生长培养基1A。

细胞传代

1. 抽吸培养基，用无Ca2+/Mg2+的磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1A并转移到试管中。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在生长培养基1A中重悬细胞。

4. 按照推荐的次培养比例1:10至1:20，每周一次或两次接种到新的培养容器中。

细胞冷冻

1. 抽吸培养基，用无Ca2+/Mg2+的PBS冲洗细胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1A并计数细胞。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在4°C的细胞冷冻培养基（BPS Bioscience #79796）中重悬细胞至约2 x 10^6细胞/毫升。

数据展示：

图1：全长Notch1/CSL荧光素酶报告基因HEK293细胞系中Notch1表达的流式细胞仪分析。

全长Notch1/CSL荧光素酶报告基因HEK293细胞（绿色）和CSL报告基因HEK293对照细胞（蓝色）用PE偶联的抗人Notch 1抗体（Biolegend #352106）染色，并通过流式细胞仪分析。Y轴代表细胞数量百分比。X轴表示PE的强度。

文献参考：

Lu F.M., et al., 1996 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93(11): 5663-5667.

Kanungo J., et al., 2008 J. Neurochem. 106: 2236-48.

Cao L. et al., 2023 Blood Adv. 10.1182/bloodadvances.2023010380

Zhou B., et al., 2022 Nature 7:95

Benedito R., et al., 2009 Cell.12;137(6):1124-35.

BPS Bioscience是一家通过ISO 9001:2015认证的生命科学领域的供应商，公司一直致力于开发药物研发领域的重组蛋白酶、蛋白酶活性/抑制剂筛选试剂盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年创立，从创立至今一直致力于提供药物研发领域的创新解决方案，以推动新的药物发现。公司主要关注的领域包括免疫疗法、表观遗传学、新型冠状病毒、CRISPR、细胞信号转导等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、组蛋白去甲基化酶、组蛋白甲基化转移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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